Solarbio Ca++Mg++-ATPase 활성 분석 키트

칼슘++마그네슘++-ATPase 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

운영장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC0960

크기: 50T/24S

구성요소:

시약 I: 액체 30 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 II: 액체 4 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 III: 가루×2. -20℃에서 보관. 로 잘 녹여주세요 1 사용 전 증류수 mL. 나머지 시약은 -20℃에서 일주일간 보관 가능.

시약 IV: 액체 2 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 V: 가루×1. 4℃에서 보관. 로 잘 녹여주세요 3 사용 전 증류수 mL. 시약 VI: 가루×1. 4℃에서 보관. 로 잘 녹여주세요 15 사용 전 증류수 mL, 4℃에서 일주일간 보관 가능.

시약 VII: 가루×1. 4℃에서 보관. 로 잘 녹여주세요 15 사용 전 증류수 mL, 4℃에서 일주일간 보관 가능.

시약 VIII: 액체 15 밀리리터×1. RT에 보관.

표준 용액: 액체 1 밀리리터×1. 10 μmol/mL 표준 인액, 4℃에서 보관.

0.5 μmol/mL 표준 인 작업 용액: 희석하다 10 μmol/mL 표준 20 증류수로 몇 번 0.5 μmol/mL 표준. 예를 들어: 추가하다 1.9 mL의 증류수를 0.1 mL 표준, 잘 섞는다.

인 고정 시약:

인 함량 측정을 위한 시약 준비: H2O의 부피 비율로 용액을 만듭니다.: 시약 VI: 시약 VII: 시약 VIII =2:1:1:1, 연한 노란색이어야 합니다. 색상이 변하면 효능이 상실됩니다., 색상이 파란색으로 변경되면 인 오염. 시약을 사용할 때 준비하십시오..

메모: 새로운 비커를 사용하는 것이 더 좋습니다, 인 오염을 방지하기 위해 시약을 만들 때 유리 막대와 유리 피펫 또는 일회용 플라스틱 제품을 사용하십시오..

제품 설명:

Ca++Mg++-ATPase는 식물에 널리 분포되어 있습니다., 동물, 미생물과 세포, ATP의 가수분해를 촉매하여 ADP와 무기 인을 형성합니다..

Ca++Mg++-ATPase는 ATP를 분해하여 ADP와 무기인을 생성합니다.. 무기인의 양을 측정하여 ATPase의 활성을 검출할 수 있습니다..

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:

분광 광도계, 책상 원심분리기, 조절 가능한 피펫, 욕조, 1 mL 유리 큐벳, 모르타르/균질화기, 얼음과 증류수.

절차:

나. 샘플 준비:

1. 박테리아 또는 세포:

박테리아 또는 세포를 원심분리 튜브에 수집, 원심분리, 그리고 상층액은 버린다. 1mL의 시약 I을 추가하는 것이 좋습니다. 5 수백만 개의 박테리아 또는 세포. 초음파를 사용하여 박테리아와 세포를 분리합니다. (얼음 위에 놓음, 초음파 파워 20%, 근무 시간 3 초, 간격 10 초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기 8000 ×g 10 4℃에서 1분간 가온 후 얼음 위에 상층액을 취하여 시험.

2. 조직:

추가하다 1 mL의 시약 I을 0.1 g의 조직, 얼음 위에서 완전히 분쇄. 원심분리기 8000 ×g 10 4℃에서 1분간 가온 후 얼음 위에 상층액을 취하여 시험.

3. 혈청: 곧장

II. 결정:

1. 예열 분광 광도계 30 분, 파장을 조정하여 660 nm, 증류수로 카운터를 0으로 설정.
2. EP 튜브에 다음 시약을 추가합니다.:

3. 인 함량 측정, 다음 시약을 추가합니다. 1.5 mL EP 튜브:

잘 섞어주세요, 그런 다음 혼합 용액을 40℃ 수조에 넣어서 10 분. 실온으로 식힌 후 흡광도를 검출합니다. 660 nm. 빈 튜브와 표준 튜브에는 하나 또는 두 개의 튜브만 있으면 됩니다..

III. 계산:

1. 혈청:

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 ATP를 분해하여 생산하는 것을 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 혈청 1밀리리터당 시간당 μmol의 무기 인.

Ca++Mg++-ATPase (U/mL)=Cs×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]×Vrv²s²

=7.5×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]

2. 조직, 박테리아, 또는 세포

• 단백질 농도:

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 ATP를 분해하여 생산하는 것을 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 조직 단백질 1mg당 시간당 μmol의 무기 인.

Ca++Mg++-ATPase (U/mg 프로트)=Cs×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]×Vrv²(VS×심폐소생술)¶T

=7.5×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]¼Cpr

• 샘플 중량:

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 ATP를 분해하여 생산하는 것을 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 시간당 무기 인의 μmol, 조직 1밀리그램마다.

Ca++Mg++-ATPase (U/g 중량)=Cs×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]×Vrv²(Vs²V1×W)¶T

=7.5×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]¼W

• 박테리아 또는 세포

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 ATP를 분해하여 생산하는 것을 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 시간당 μmol의 무기 인 10000 세포 또는 박테리아.

Ca++Mg++-ATPase (U/104셀 )=Cs×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]×Vrv²(Vs²V1×500)¶T

=0.015×[ΔA(티)-ΔA(씨)]¶[ΔA(에스)-ΔA(비)]

CS: 표준관의 농축액, 0.5 μmol/mL;

로프: 총 반응량, 0.5 밀리리터; 대: 샘플량, 0.2 밀리리터;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도 (mg/mL); 티: 반응 시간 (분), 1/6 시간;

여: 샘플 중량 (g);

VI: 시약의 양 I, 1 밀리리터;

500: 박테리아나 세포의 양, 5 백만.

메모

1. 이 키트는 감지할 수 있습니다. 24 Ca++Mg++ -ATPase 샘플 튜브 50 각 샘플의 튜브에는 제어용으로 하나의 튜브가 필요합니다..
2. 이 방법은 추적의 특징을 가지고 있습니다., 민감하고 빠르다. 측정에 사용되는 시험관에는 인산염이 전혀 포함되어 있지 않습니다.. 인 오염을 피하는 것이 탐지 성공의 열쇠입니다..

실험예:

1. 췌장을 취하고 추가하십시오 1 얼음조 균질화를 위한 시약 I의 mL. 4℃에서 원심분리한 후 10 분, 상등액을 얼음 위에 올려 놓고 측정 단계에 따라 작동합니다.. ΔAT = 0.916-0.389=0.527, ΔAS =0.398-0.004=0.394

Ca++Mg++- ATPase 활동 (U/g 질량) = 7.5 × ΔAT ¼ΔAS ¼ W = 100.32 U/g 질량.

2. 버드나무 0.1g을 취하여 첨가한다. 1 얼음조 균질화용 시약 Ⅰ의 mL. 4℃에서 원심분리한 후 10 분, 상등액을 얼음 위에 놓고 측정 단계에 따라 작동합니다.. ΔAT=0.137-0.124=0.013, 그리고 ΔAS=398-0.004=0.394

칼슘 + + 마그네슘 + + – ATPase 활동 (U/g 질량) = 7.5×ΔAT ¼ ΔAS ¼ W = 2.47 U/g 질량.

참고자료

[1] 데이타일스 MJ, 존슨 E A, 맥카티 RE. 양이온성 양친매성 물질에 의한 ATP 합성효소의 촉매 부분의 ATPase 활성 억제[제이]. 생화학 및 생물물리학 저널 (BBA)-생물에너지학, 2008, 1777(4): 362-368.

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