Solarbio 크레아틴 키나제 (CK) 활동 분석 키트

크레아틴 키나제 (CK) 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

운영장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC1140

크기:50T/48S

구성요소:

용액 추출: 60 밀리리터 ×1. 4℃에서 보관.

시약 I: 가루×1, -20℃의 어두운 곳에 보관. 에 용해됨 10 사용 전 증류수 mL, 사용하지 않은 시약은 재포장하여 -20℃에 보관합니다., 반복 냉동 및 해동 금지.

시약 II: 가루×1, -20℃에 보관. 에 용해됨 0.5 사용 전 증류수 mL, 사용하지 않은 시약은 재포장하여 -20℃에 보관합니다., 반복 냉동 및 해동 금지.

시약 III: 가루×2, -20℃에 보관. 에 용해됨 0.5 사용 전 증류수 mL, 다 소모되지 않는 시약은 재포장하여 -20℃에 보관한다., 반복 냉동 및 해동 금지.

시약 IV: 가루×1, -20℃에 보관. 에 용해됨 0.65 사용 전 증류수 mL, 사용하지 않은 시약은 재포장하여 -20℃에 보관합니다., 반복 냉동 및 해동 금지.

시약 V: 15 밀리리터 ×1. 4℃에서 보관.

제품 설명:

크레아틴 키나제 (CK) (EC 2.7.3.2) 크레아틴 포스포키나제라고도 알려져 있습니다., 주로 심장에 존재하는 것, 근육, 그리고 뇌. 크레아틴과 ATP 사이의 인산 반응을 가역적으로 촉매할 수 있습니다.. 세포 에너지 수송과 직접적으로 관련된 중요한 키나제입니다., 근육 수축과 ATP 재생.

CK는 크레아틴 인산염과 ADP를 촉매하여 크레아틴과 ATP를 생성합니다., 헥소키나아제는 ATP와 포도당을 촉매하여 포도당-6-인산을 생성합니다., 그리고 포도당-6-인산 탈수소효소는 포도당-6을 촉매합니다.- NADPH를 생성하는 인산염과 NADP+, 결과적으로 340 nm 흡광도 값, CK 효소 활성을 발현하는데 사용됩니다..

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비

저울, 저온 원심분리기, 항온수욕, 분광 광도계, 1 mL 석영 큐벳 및 증류수.

절차

나. 조효소액 추출:

1. 1. 조직 샘플:

조직 질량의 비율 (g): 추출액의 부피 (밀리리터): 1:5~10 (무게를 측정하는 것이 좋습니다 0.1 g의 조직, 추가하다 1 mL의 추출 용액) 얼음조 균질성을 위해. 원심분리기 10000 ×g 15 4℃에서 분, 상등액을 채취하여 얼음 위에 올려 놓고 테스트해 보세요..

2. 혈청 샘플:

직접 결정.

3. 세포 샘플:

세포의 수 (104): 추출 용액의 부피(밀리리터) 500~1000 입니다:1 (1 mL의 Extract 용액을 추가하는 것이 좋습니다. 5 백만개의 세포), 추출 용액이 추가됩니다, 얼음조에서 초음파로 세포를 파괴합니다. (힘: 300여, 초음파: 3에스, 간격: 7에스, 총 시간: 3 분). 원심분리기, 10000×g 10 4℃에서 분, 상등액을 얼음 위에 올려 놓고 테스트해 보세요..

II. 시험 절차:

1. 분광 광도계를 1시간 이상 예열합니다. 30 분, 파장을 조정하여 340 nm, 증류수로 0으로 조정.
2. 작업 솔루션: 시약 I을 섞는다, 시약 II, 시약 III, 시약 IV와 시약 V의 비율 70:4:7:10:90 (부피 비율) 사용하기 전에. 솔루션 사용 시기 준비. 인큐베이션 20 사용하기 전에 실온에서 몇 분 동안 (이 단계는 생략할 수 없습니다).
3. 작업 테이블: 다음 시약을 추가하십시오. 1 mL 큐벳

III. 계산 CK:

• 조직 단백질 농도로 계산:

효소 활성의 정의: 효소활성의 1단위는 효소의 생성을 촉매하는 효소의 양으로 정의된다. 1 37℃에서 분당 NADPH nmolof 및 단백질 1mg당 pH7.0.

CK 활동 (U/mg 프로트) = ΔA ¼(ε×d)×VRT×109 ¼ (VS× 심폐소생술) ¼ 티= 268 ×ΔA ²Cpr

• 조직 샘플의 품질로 계산:

효소 활성의 정의: 효소활성의 1단위는 효소의 생성을 촉매하는 효소의 양으로 정의된다. 1 샘플 1g당 37℃ 및 pH7.0에서 분당 NADPH nmol.

CK 활동 (U/g 신선 중량) = ΔA ¼(ε×d)×VRT×109 ¼ (VS│VST×W) ¼T= 268×ΔA ²W

• 혈청량으로 계산:

효소 활성의 정의: 효소활성의 1단위는 효소의 생성을 촉매하는 효소의 양으로 정의된다. 1 37℃에서 분당 NADPH nmol, 혈청 1밀리리터당 pH7.0.

CK 활동 (U/mL) = ΔA ¼(ε×d)×VRV×109 ¼ VS¶T= 268×ΔA

• 세포 수별:

효소 활성의 정의: 효소활성의 1단위는 효소의 생성을 촉매하는 효소의 양으로 정의된다. 1 37℃ 및 pH7.0에서 분당 NADPH nmol 10000 세포.

CK 활동 (U/104셀)=ΔA π(ε×d)×VRV×109¶(VS ¼ VST×N)¼T=268 ×ΔA ¼ N

이자형: NADPH의 몰흡광계수, 6.22×103L/몰/cm; 디: 큐벳의 가벼운 직경, 1 센티미터;

VRT: 반응 시스템의 총 부피, 0.001 밀리리터;

VS: 반응 시스템의 샘플 부피, 0.2 밀리리터; VST: 추출액의 부피, 1 밀리리터;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL; 여: 샘플 질량의 질량, g;

N: 세포의 수, 104 단위; 티: 반응 시간, 3 분.

메모:

1. 혈청의 CK가 안정적이지 않습니다.. 시료는 가능한 한 빨리 수집 및 측정됩니다.. 혈청의 CK는 다음에 대해 안정적입니다. 24 4℃ 암실에 보관한 후 몇 시간 후.
2. 시료의 단백질 함량은 별도로 측정해야 합니다.. BCA 단백질 함량 측정 키트를 사용하여 측정할 수 있습니다..
3. OD 값이 다음보다 큰 경우 0.6, 샘플은 추출 용액으로 적절하게 희석될 수 있습니다., 희석비율에 따라 계산식은 변경될 수 있습니다..
4. ΔAB는 일반적으로 다음을 초과하지 않습니다. 01.

실험적 사례：

1. 쥐의 뇌 0.1g을 섭취하세요., 추출용액 1mL를 첨가한다, 균질화 및 분쇄. 상층액을 취한다, 그런 다음 추출물로 희석 4 측정된 단계에 따라 시간을 측정하고 감지합니다.. ΔAT=A2T를 계산하세요.- A1T=0.638-0.149=0.489, ΔAB=A2B-A1B=0， ΔA=ΔAT-ΔAB=0.489-0=0.489, 샘플 중량에 따른 효소 활성 계산:

CK 활성( U/g 중량) =268×ΔA ² W×4( 희석 비율) =268×0.489 ¼0.1×4( 희석 비율)

=5242.08U/g 무게.

2. 200μL의 오리 혈청을 채취하여 직접 검출, ΔAT=A2T-A1T=0.445-0.423=0.022를 계산합니다., ΔAB=A2B- A1B=0, ΔA=ΔAT-ΔAB=0.022-0=0.022, 혈청의 양에 따라 효소 활성을 계산합니다.:

CK 활성(U/mL)=268×ΔA=268×0.022=5.896 U/mL.

참고자료：

• 디팡 리, 닝루, 한지춘, et al.Eriodictyol은 JAK2의 활성화를 통해 심근 허혈-재관류 손상을 약화시킵니다.. 면역학의 개척지. 2018년 1월;(IF3.845)
• 쉬 Y, 멩 X, 사랑X, 외. ButhusmartensiiKarsch 항종양-진통제 펩타이드의 돌연변이는 hNav1에 대한 억제를 감소시킵니다.. 4 그리고 hNav1. 5 진통 활성을 유지하면서 채널을 유지합니다.[제이].생물학 화학 저널, 2017, 292(44):18270-18280

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