Solarbio 말론디알데히드 (MDA) 콘텐츠 분석 키트

말론디알데히드 (MDA) 콘텐츠 분석 키트

메모: 예측하는 것이 필요하다 2-3 공식적인 결정 이전에 큰 차이가 있는 표본. 운영장비: 분광 광도계.

고양이 번호: BC0020

크기: 50T/48S

구성요소:

메모: MDA 검출을 위한 작업 솔루션은 용해가 어렵습니다., 70℃로 가열하고 강하게 진동시켜 용해를 촉진시킬 수 있는 제품입니다.. 또는 초음파 처리를 통해 용해를 촉진합니다..

제품 설명:

• 과산화지질은 산소 자유 라디칼과 불포화 지방산의 상호 작용을 통해 생성됩니다., 결국 말론디알데히드와 같은 화합물을 형성함 (MDA). 지질 과산화 수준이 지표 역할을 합니다., MDA 수준을 측정하여 평가할 수 있습니다..
• 산성 및 고온 조건에서, 갈색-적색 화합물, 3,5,5-세 메틸 설파메톡사졸-2,4-두 케톤, MDA와 티오바르비투르산의 축합 반응을 통해 합성됩니다. (추후 공지). 이 화합물은 다음에서 최대 흡수를 나타냅니다. 532 nm. 지질 과산화 평가에는 비색 분석이 포함됩니다.. 하지만, 수용성 설탕의 존재는 검출 과정을 방해할 수 있습니다.. 수용성 당과 TBA의 반응은 다음의 흡수 파장과 발색 반응을 일으킵니다. 450 nm 및 532 nm. 이 분석 키트에는, MDA 함량은 흡광도의 변화에 ​​의해 결정됩니다. 532 nm, 450 nm, 그리고 600 nm.
• 식물 조직에는 자당이 있고 동물 조직에는 포도당이 존재하기 때문에, 키트에는 자당과 포도당에 맞춰진 두 가지 계산 공식이 포함되어 있습니다.. 이 공식은 지질 평가에 적합합니다..

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:

분광 광도계, 욕조, 책상 원심분리기, 이송 피펫,1 mL 유리 큐벳, 모르타르/균질화기, 얼음과 증류수.

절차:

나. 샘플 준비:

박테리아 또는 세포:

원심분리 튜브에 박테리아나 세포를 수집합니다.. 5 수백만 개의 박테리아나 세포가 혼합될 수 있습니다. 1 mL의 추출 시약. 초음파 처리를 사용하여 박테리아와 세포를 분리합니다. (얼음 위에 놓음, 초음파 출력 200W, 초음파 시간 3 초, 간격 10 초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기 8000 ×g 10 4℃에서 1분 동안 불용성 물질 제거, 시험 전 얼음에 상층액을 채취.

조직:

0.1 g의 조직은 다음과 혼합될 수 있습니다. 1 mL의 추출 시약 및 얼음 욕조에서 완전히 균질화됨. 그런 다음 원심분리기를 8000 ×g 10 4℃에서 1분 동안 불용성 물질 제거, 시험하기 전에 얼음에 상등액을 채취하십시오..

혈청:

감지하다

II. 결정 절차:

1. 분광광도계 예열 30 분, 증류수로 0을 설정하다
2. 다음 목록으로 시약을 추가하세요.:

혼합물은 100℃에서 배양됩니다. 60 분 (수분 손실을 방지하기 위해 단단히 밀착), 얼음에 냉각, 그리고 원심분리 10000 ×g 10 불용성 물질을 제거하기 위해 실온에서 몇 분 동안. 상청액을 섭취한다 1 mL 유리 큐벳, 그리고 흡광도를 측정합니다. 450 nm, 532 nm 및 600 nm.

ΔA450=A450(티)-A450(비), ΔA532=A532(티)-A532(비), ΔA600 =A600(티)-A600(비). 빈 튜브는 한두 번 테스트해야 합니다..

III. 계산:

1. 조직, 박테리아 또는 배양된 세포

• 단백질 농도:

MDA (nmol/mg prot)=(6.45×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv²(Cpr×Vs)

=5×(6.45×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)¼Cpr

• 샘플 중량:

MDA (nmol/g 중량)=( 6.45×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×ΔA450)×Vrv²(W×Vs²sv)

=5×(6.45×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×ΔA450)¼W

• 셀라마운트:

MDA (nmol/104셀)=( 6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×AΔ450)×Vrv²(400×Vs│Vsv)

=0.01×(6.45×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×ΔA450)

• 혈청:

MDA (nmol/mL)=(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv│Vs

=5×(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)

2. 식물 조직:

• 샘플 중량

MDA (nmol/g 중량)= (6.45×(ΔA532-ΔA600)-0.56×ΔA450)×Vrv²(W×Vs²sv)

=5×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 0.56×ΔA450)¼W

• 단백질 농도:

MDA (nmol/mg prot)=( 6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 0.56×ΔA450)×Vrv²(Cpr×Vs)

=5×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 0.56×ΔA450)¼Cpr

로프: 총 반응량, 1 밀리리터; 대: 샘플량, 0.2 밀리리터;

VSV: 추출량, 1 밀리리터;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL; 여: 샘플 중량, g;

400: 박테리아와 세포의 총 수, 5 백만.

메모:

시료의 흡광도 값이 너무 낮다고 판단되는 경우, 끓는 물 목욕 시간은 다음에서 조정할 수 있습니다. 60 분까지 90 분 이상. 오류를 방지하려면 동일한 실험에서 MDA 감지를 동시에 확장해야 합니다..

참고자료

• 스피츠 DR, 오벌리 패 승. 포유류 조직 균질액의 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 활성 분석[제이]. 분석 생화학,1989
• Masayasu M, 히로시 Y. 임상용 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 활성의 단순화된 분석 방법[제이]. 화학클리닉

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