퍼옥시다아제 (현물 상환 지불) 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

운영장비: 분광 광도계 카탈로그 번호: BC0090 크기：50T/48S

구성요소:

용액 추출: 60 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 I: 40 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 II: 0.5 밀리리터 ×1. 4℃에서 보관. 사용 전 원심분리기. 가져가다 0.22 mL의 시약 II를 첨가하고 3.33 시약 I의 mL, 나중에 사용하기 위해 섞어주세요 (약 27T). 즉시 사용할 수 있도록 준비하세요., 또는 시료량에 따라 비례하여 준비할 수도 있습니다..

시약 III: 10 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

제품 설명

퍼옥시다아제 (현물 상환 지불, EC 1.11.1.7) 동물에 널리 존재, 식물, 그리고 미생물. 과산화수소에 의한 페놀과 아민의 산화를 촉매할 수 있습니다., 과산화수소의 독성을 제거하는 이중효과를 가지고 있습니다., 페놀, 및 아민. 과산화수소가 있는 경우, POD는 H2O2 산화를 촉진하여 특정 기질을 흡수하는 하나의 물질을 생성할 수 있습니다. 470 nm.

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비

분광 광도계, 책상 원심분리기, 트랜스페터, 1 mL 유리 큐벳, 모르타르/균질화기, 얼음과 증류수.

절차

나. 샘플 준비:

ㅏ. 박테리아 또는 세포

박테리아 또는 세포를 원심분리 튜브에 수집, 상층액은 원심분리 후 폐기됩니다.. 정도 복용하는 것이 좋습니다 5 백만 개의 박테리아/세포를 추가하고 1 mL의 추출 용액. 박테리아나 세포는 초음파 처리로 분리됩니다. (힘: 20% 또는 200 여, 작업시간 3초, 간격 10초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기 8000 rpm 및 4℃ 10 분, 상청액은 테스트에 사용됩니다.

비. 조직

정도 복용하는 것이 좋습니다 0.1 g 티슈 추가 1 mL의 추출 용액, 얼음 위에서 완전히 분쇄.

원심분리기 8000 rpm 10 4℃에서 분, 상청액은 테스트에 사용됩니다.

씨. 혈청 (혈장) 견본: 샘플 감지

II. 결정 절차

1. 예열 분광 광도계 30 분, 파장을 조정하다 470 nm, 증류수로 0을 설정하다
2. 시약 I 배치, 37℃에서 시약 II 및 시약 III (포유 동물) 또는 25℃(다른 종) ~을 위한 10 분 전
3. 다음 목록으로 시약을 추가하세요.:

위의 시약은 1 mL 유리 큐벳을 순서대로, 즉시 혼합 및 시간 설정. 에 대한 흡광도 값 A1 30 s 및 90년대용 A2 470 nm가 기록됩니다., ΔA=A2-A1.

III. 계산

나. 혈청 (혈장)견본

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 물질의 흡광도를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 0.01 에서 변경 470 혈청 1밀리리터당 반응 시스템의 nm(분당) (혈장).

현물 상환 지불(U/mL)=ΔA×Vrv²Vsv¼0.01¼T =7133×ΔA

II. 조직, 박테리아 또는 배양 세포

ㅏ. 단백질 농도

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 물질의 흡광도를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 0.01 에서 변경 470 밀리그램 단백질당 분당 반응 시스템의 nm.

현물 상환 지불(U/mg 프로트)=ΔA×Vrv²(Vsv×심폐소생술)0.01T =7133×ΔACpr

비. 샘플 중량

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 물질의 흡광도를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 0.01 에서 변경 470 nm 조직당 분당 반응 시스템.

현물 상환 지불(U/g 신선 중량)=ΔA×Vrv²(W× Vsv ² Vs)0.01T =7133×ΔAW

씨. 셀라마운트

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 물질의 흡광도를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 0.01 에서 변경 470 매분마다 반응 시스템에서 nm 10 수천 개의 박테리아 또는 세포.

현물 상환 지불(U/104 셀)=ΔA×Vrv²(500×Vsv│Vs)¼0.01²T =14.27×ΔA

로프: 총 반응량, 1.07 밀리리터; VSV: 총 상층액 부피, 0.015 밀리리터; 대: 솔루션 볼륨 추출, 1 밀리리터;

티: 반응 시간, 1 분;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL; 여: 샘플 중량, g;

500: 박테리아 또는 세포의 총 수, 5 백만.

메모:

1. 한번에 측정할 샘플이 많은 경우, 시약 I의 혼합물, II, III과 증류수를 비율에 맞게 준비할 수 있습니다., 그리고 혼합물은 37℃에 놓일 수 있습니다 (포유류의) 또는 25℃ (다른 종) 이상 10 분. 15 μL의 샘플 및 1055 측정을 위해 혼합물의 μL를 추가할 수 있습니다..
2. ΔA가 다음보다 작으면 0.005, 반응시간을 연장할 수 있다 5 분. ΔA가 다음보다 큰 경우 0.5 또는 반응 용액에 기포가 더 많습니다., 샘플을 추출물로 희석하여 측정할 수 있습니다., 계산식에 해당 희석액을 곱합니다..
   

   참고자료

   • 루베니 R . 머스크멜론의 저항성에 대한 생화학적 지표로서의 퍼옥시다제 활성 ( 오이멜론 ) 슈도페로노스포라 큐벤시스[제이]. 식물병리학, 1992,82(7).
   • 도르게 D R , 디비 R L , 처치웰 M I . 퍼옥시다제에 의해 생성된 유색 구아이아콜 산화 생성물의 동정[제이]. 분석 생화학, 1997,250(1):10-17.

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