Solarbio 숙신산염 탈수소효소 (SDH) 활동 분석 키트

숙신산탈수소효소 (SDH) 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

탐지장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC0950

크기: 50T/48S

구성요소

시약 I: 60 밀리리터×1, -20℃에 보관. 시약 II: 0.6 밀리리터×1, -20℃에 보관. 시약 III: 5 밀리리터×1, 4℃에 보관.

시약 IV: 가루×1, 4℃에 보관. 솔루션이 사용되는 경우, Reagent III에 첨가하여 용해하여 사용.

시약 V: 가루×1, 4℃에 보관. 추가하다 4 용액을 사용할 경우 증류수 mL, 사용하지 않은 시약은 4℃에 보관.

시약 VI: 가루×1, -20℃에 보관. 추가하다 3.333 용액을 사용할 경우 증류수 mL, 사용하지 않은 시약은 4℃에 보관.

설명

숙신산탈수소효소 (SDH, EC 1.3.5.1) 동물에게서 널리 발견된다, 식물, 미생물과 배양세포. SDH는 미토콘드리아의 마커 효소입니다., 미토콘드리아 내막에 위치한 막결합효소입니다.. 또한 호흡 전자 전달과 산화적 인산화의 핵심 포인트 중 하나입니다.. 게다가, 다양한 원핵 세포의 호흡 사슬에 전자를 제공합니다..

SDH는 숙신산에서 푸마르산으로의 탈수소화를 촉매할 수 있습니다.. 탈수소화는 2,6-다이클로로페놀 인도페놀을 감소시킬 수 있습니다. (DCPIP) 페나진 디메틸 설페이트의 전달하에 (PMS). 2,6- DCPIP는 다음과 같은 특징적인 흡수 피크를 갖습니다. 600 nm. 2,6-DCPIP의 환원율은 흡광도 변화에 따라 결정됩니다. 600 nm, SDH 효소의 활성을 나타내는 것.

필수이지만 제공되지 않음

분광 광도계, 욕조, 탁상용 원심분리기, 조절 가능한 피펫, 모르타르/균질화기, 1 mL 유리 큐벳, 얼음과 증류수.

규약

나. SDH 추출:

정확하게 무게를 재다 0.1 g의 조직 또는 수집 5 백만개의 세포, 추가하다 1 mL의 시약 I 및 10 시약 II의 μL, 얼음조에서 균질화기/모르타르를 사용하여 균질화합니다., 완전히 갈아서, 원심분리기 11000 ×g 10 4℃에서 분, 상등액을 채취하여 얼음 위에 올려 놓고 테스트해 보세요..

II. 절차

1. 예열 분광 광도계 30 분, 파장을 조정하다 600 nm, 증류수로 0으로 설정.
2. 절차 테스트

각 시약을 추가합니다. 1 mL 유리 큐벳을 차례로, Reagent VI 추가와 동시에 타이밍 시작, 의 파장에서 초기 흡광도 A1을 기록한다. 600 nm 20 초. 그런 다음 큐벳을 반응 용액과 함께 37℃ 수조에 넣습니다. (포유 동물) 또는 25℃ (다른 종), 그리고 정확한 반응 1 분. 빨리 큐벳을 꺼내서 말려주세요, 흡광도 A2를 기록한다. 80 초 600 nm. ΔA = A1-A2, ΔAT를 구하다, ΔAB.

III. SDH 계산 활동

결정을 위한 계산식 1 mL 유리 큐벳.

• 단백질 농도

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 다음과 같은 효소의 소비를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 조직 단백질 밀리그램당 반응 시스템에서 분당 2,6-다이클로로페놀 인도페놀의 nmol.

SDH(U/mg 프로트)=[(ΔAT-ΔAB)¶(ε×d)×VRV×109]¶(CPR×VS) ¼T=1555.556×(ΔAT-ΔAB)¼Cpr

• 샘플 중량

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 다음과 같은 효소의 소비를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 매 그램 조직당 반응 시스템에서 분당 2,6-디클로로페놀 인도페놀의 nmol.

SDH(U/g)=[(ΔAT-ΔAB)¶(ε×d)×VRV×109]¶(VS│VST×W) ¼T=1571.111×(ΔAT-ΔAB)¼W

• 세균이나 세포

단위 정의: 효소 활성의 1단위는 다음과 같은 효소의 소비를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 1 매 반응 시스템에서 분당 2,6-디클로로페놀 인도페놀의 nmol 10 수천 개의 세균 또는 세포.

SDH(U/104 셀)=[(ΔAT-ΔAB)¶(ε×d)×VRV×109]¶(VS²VST×500) ¶T

=3.142×(ΔAT-ΔAB)

VRT: 총 반응량, 0.98×10-3L;

이자형: 2,6-DCPIP의 몰 흡광 계수, 2.1×104L/몰/cm; 디: 큐벳의 가벼운 직경, 1 센티미터;

대: 샘플량, 0.03 밀리리터;

VST: 시약 I과 시약 II의 양을 추가합니다., 1.01 밀리리터; 티: 반응 시간(분), 1 분;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL; 여: 샘플 중량, g;

500: 세포 또는 세균, 5 백만.

메모

1. 변성 및 비활성화를 방지하기 위해 측정 중에 모든 시약과 샘플을 얼음 위에 놓아야 합니다..
2. ΔA가 다음보다 큰 경우 0.5, 효소 용액은 효소 추출물로 희석하여 ΔA를 미만으로 얻어야 ​​합니다. 0.5, 검출 감도를 향상시킬 수 있는.
3. 추출액에는 일정 농도의 단백질이 포함되어 있기 때문에 (~에 대한 1 mg/mL), 시료의 단백질 농도를 결정할 때 추출액 자체의 단백질 함량을 빼야 합니다..

실험예:

1. 신장 0.1g을 섭취하세요., 추가하다 1 mL의 시약 Ⅰ 및 10 μL 시약 Ⅱ, 얼음 욕조로 균질액을 분쇄합니다., 4℃, 11000g 원심분리기 10 분, 그리고 상등액을 얼음 위에 놓는다.. 결정 절차에 따르면, 효소 활성은 다음과 같이 계산됩니다.: ΔAT= A1T- A2T=0.82-0.681=0.139, ΔAB= A1B- A2B=905-0.904=0.001

SDH 활동 (U/g 질량) = 961.905×(ΔAT- ΔAB) ¼ W =2168.13 U/g 질량.

참고자료

• 파토레티 P, 베르토니 프레다리 C, 카셀리 U, 외. 노화 동안 쥐 Purkinje 세포 미토콘드리아의 숙신산 탈수소 효소 활성 손상[제이]. 노화와 발달의 메커니즘, 1998, 101(1-2): 175- 182.

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