트리글리세리드(TG) 콘텐츠 분석 키트
메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..
운영장비: 마이크로플레이트 리더/분광 광도계
카탈로그 번호: BC0625
크기:100T/96S
구성요소:
시약 I: 자체 제공 시약, 추가하다 80 n-헵탄 1mL 및 80 빈 유리병에 이소프로필 알코올 1mL. 밀봉하고 잘 섞어주세요, 4℃에서 보관.
시약 II: 3 밀리리터×1병. 4℃에서 보관.
시약 III: 10 밀리리터×1병. 4℃에서 보관.
시약 IV: 3 밀리리터×1병. 4℃에서 보관, 빛으로부터 보호됨. 시약 V: 10 밀리리터×1병. 4℃에서 보관, 빛으로부터 보호됨. 시약 VI: 10 밀리리터×1병. 4℃에서 보관, 빛으로부터 보호됨.
기준: 분말×1병, 추가하다 5 사용 전 시약 I의 mL. 1 mg/mL 중성지방 표준용액, 4℃에서 보관.
제품 설명:
트리글리세리드(TG) 장쇄지방산과 글리세롤이 결합하여 형성된 지방분자입니다., 이는 세포막의 주성분일 뿐만 아니라, 뿐만 아니라 중요한 호흡 기질이기도 합니다.. TG는 이소프로필 알코올로 추출됩니다., KOH에 의한 TG의 비누화 후 글리세롤과 지방산으로 가수분해. 글리세롤은 과요오드산에 의해 산화되어 포름알데히드를 형성합니다.. 염화물 이온이 있을 때 포름알데히드와 아세틸아세톤이 응축되어 노란색 성분이 형성됨. 노란색 성분은 다음과 같은 특성을 흡수합니다. 420 nm이고 TG 함량에 비례함.
필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:
분광 광도계/마이크로플레이트 리더, 마이크로 유리 큐벳/96웰 평면 바닥 플레이트, n-헵탄, 이소프로필 알코올, 욕조, 조절 가능한 피펫, 증류수와 125 빈 병의 mL.
절차:
나. 샘플 준비:
- 조직:
Ice-bath 균질성은 조직 질량의 비율에 따라 수행됩니다. (g): 시약 Ⅰ량 (밀리리터) = 1: 5~10 (약 복용하는 것이 좋습니다 0.1 g 티슈 추가 1 mL의 시약 I). 원심분리기 8000 g에 대한 10 4℃에서 분, 상청액은 테스트에 사용됩니다.
- 박테리아:
모으다 5 백만 개의 세포나 박테리아를 원심분리 튜브에 넣습니다., 그런 다음 상층액을 버립니다., 최종 추가 1 mL의 시약 I. 초음파로 박테리아나 세포를 분리하는 방법 1 분 (힘 20%, 작업 시간 2초, 간격 1초). 원심분리기 8000 g에 대한 10 4℃에서 분, 상청액은 테스트에 사용됩니다.
- 혈청: 감지하다
II. 절차:
- 예열 분광 광도계 30 분, 파장을 조정하여 420 nm, 증류수로 0을 설정하다.
- 수조를 65℃로 예열하세요.
시약명 (μL) | 빈 튜브 (AB) | 표준 튜브( 처럼) | 시험관(에) |
증류수 | 40 | – | – |
표준 용액 | – | 40 | – |
TG 테스트 솔루션 | – | – | 40 |
시약Ⅰ | 125 | 125 | 125 |
시약 Ⅱ | 25 | 25 | 25 |
시약 I을 첨가한 후 잘 섞으세요., 시약 II 추가, 세게 흔들어 30 에스, 몇 분 서 있다. 레이어링 후, 15 μL의 상층 용액을 채취하여 새로운 EP 튜브에 넣습니다.. |
- TG 콘텐츠 감지:
시약명 (μL) | 빈 튜브 (AB) | 표준 튜브 (처럼) | 시험관 (에) |
상위 레이어 솔루션 | 15 | 15 | 15 |
시약 Ⅲ (uL) | 50 | 50 | 50 |
시약 Ⅴ (uL) | 15 | 15 | 15 |
잘 섞어주세요, 65℃의 수조 3 분. | |||
시약Ⅴ (uL) | 50 | 50 | 50 |
시약 Ⅵ (uL) | 50 | 50 | 50 |
잘 섞어주세요, 65℃의 수조 3 분. |
식힌 후, EP 튜브의 액체를 마이크로 유리 큐벳/96웰 평면 바닥 플레이트로 옮깁니다., 그리고 흡광도를 결정합니다. 420 nm.
메모: 빈 튜브와 표준 튜브는 한 번만 측정하면 됩니다..
III. 계산:
1) 혈청:
TG(mg/dL)=C×(에- AB)¶(처럼- AB)×100 =(에- AB)¶(처럼- AB)×100
2) 조직:
단백질 농도:
TG(mg/mg 프로트)= C×V×(에- AB)¶(처럼- AB) ¶(Cpr×V)=(에- AB)¶(처럼- AB) ¼Cpr
샘플 중량:
TG(mg/g) = C×V×(에- AB)¶(처럼- AB) ¼W=(에- AB)¶(처럼- AB) ¼W
3 ) 박테리아 또는 세포:
TG(U/104 셀) =C×(에- AB)¶(처럼- AB) ¶D=(에- AB)¶(처럼- AB) ¼D 1dL =100mL;
V: 시약의 양1, 1 밀리리터;
씨: 표준농도, 1 mg/mL;
심폐소생술: 샘플 단백질 농도 (mg/mL); 여: 샘플 중량(g);
디: 박테리아 또는 세포의 밀도, 104 세포/mL.
메모:
- 키트에 휘발성 물질이 포함되어 있습니다.. 실험 중에는 장갑과 마스크를 착용해야 합니다.. 시약병 뚜껑은 다음 시간에 맞춰 닫아야 합니다.
- 시약 Ⅱ 첨가 후, 반복적이고 격렬하게 진동을 가해야 합니다., 시험 용액의 중성지방이 완전히 추출될 수 있도록, 진동 진폭, 시간, 여러 번 반복하며 계층화 시간을 기다려야 한다.
- 테스트의 반복성을 보장하기 위해, 각 수조 후 냉각 시간은 다음과 같아야 합니다.
- 시험관의 OD 값이 다음보다 큰 경우 1.5, 테스트하기 전에 시약 I로 샘플을 적절하게 희석하는 것이 좋습니다., 계산 중에 해당 희석배수를 곱합니다..
참고자료
- 플레처 MJ. 혈청 중성지방을 추정하기 위한 비색법[제이]. 클리니카 치미카 액타, 1968, 22(3): 393-397.
- 헤라클레스 DM, 시한TL. 혈청 글리세롤 및 트리글리세리드의 화학발광 측정[제이]. 분석 화학, 1978, 50(1):22-25.
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기술 사양:
검출 한계: 0.0372 mg/mL
선형 범위: 0.0625-3 mg/mL
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