SENO 정자 샘플 DNA 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 그리고 건조한 환경에서는, 유효기간이 있는 12 개월. DNA 추출 정제 컬럼은 다음 용도로 보관할 수 있습니다. 1 시원하고 건조한 환경에서 1년 동안. 단백질분해효소 K 및 RNase A 방부제 함유, 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 시약 키트는 분자생물학 연구용이므로 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 시약 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.. 보호복, 고글 착용 등의 보호 조치가 권장됩니다..

3.3 이 시약 키트를 사용하는 동안, 고속 원심분리기, 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 멸균 탈이온수, EP 튜브는 사용자가 준비해야 합니다..

4. 시약 키트 소개

The sperm sample genomic DNA extraction kit provides a rapid and efficient purification solution for sperm sample DNA. It achieves sample DNA 정제 effectively through a dedicated extraction buffer system combined with specific nucleic acid purification columns.

This kit can extract sperm sample DNA within 30 분, 전체 정제 과정에서 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다.. 추출된 DNA는 다음과 같은 목적으로 직접 사용될 수 있습니다. PCR, 서던 블로팅, 및 기타 응용 프로그램.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험을 시작하기 전에:

ㅏ.Reagent Buffer SP:This buffer should be stored long-term in an environment between 2℃ and 8℃

비.시약 완충액 C 저온 조건에서 침전될 수 있음. 65℃로 가열하는 것이 좋습니다. 5 분. 침전물이 용해된 후, 정상적으로 사용할 수 있어요.

씨.세척 버퍼 1: 사용하기 전에, add the specified amount of anhydrous ethanol as indicated on the reagent bottle label. 무수 에탄올 첨가를 나타내기 위해 라벨에 체크 표시를 하십시오..

디. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. If EDTA has an impact on subsequent experiments, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the elution buffer.

1. 샘플 처리:

피펫 200μl of frozen sperm, incubate at 75℃ for 10 minutes until the sperm sample is not viscous. 원심분리기 12000 rpm 5 분, aspirate the supernatant as much as possible, and the sperm cells will sediment at the bottom of the tube.

2. Add to the sediment from the previous step: 400μl Reagent Buffer SP, 20μl 단백질분해효소 K (10 mg/ml), 20μl RNaseA (10 mg/ml).Digest at 65℃ for 10 분, 뒤집어서 섞는다 6-7 times during digestion until the sample is fully digested.
3. 같은 양의 것을 추가하십시오. 시약 완충액 C and an equal volume of anhydrous ethanol, and mix well by pipetting.

(예를 들어: If you add 400μl of Reagent Buffer IV, you will need to add approximately 460μl of Reagent Buffer C and 460μl of anhydrous ethanol. A small amount of precipitation may form after adding Reagent Buffer C, 그러나 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다.)

4. Transfer the obtained liquid to a DNA extraction purification column (cassette) (매번 약 650-700μl). Let it stand at room temperature for 2 분, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 수집된 폐액을 폐기합니다., 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..
5. 단계 반복 4, 남은 액체를 DNA 추출 정제 컬럼에 첨가 (cassette), 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, discard the waste liquid and the collection tube.
6. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (cassette) 수집 튜브에, 추가하다 300 세척 완충액의 μl 1, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 폐액을 버리다, DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (cassette) back into the tube for the next step.

(메모: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. 추가하다 500세척 완충액의 μl 1 DNA 추출 정제 컬럼으로 (cassette), 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane more thoroughly.
8. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (cassette) 새로운 원심분리 튜브에, 뚜껑을 열어라, incubate at 65℃for 2 분. Extend this step if necessary to evaporate ethanol as much as possible, preventing ethanol residue from affecting downstream experiments.
9. Drop-suspend 50-100용출 완충액 μl 멤브레인 위에, 원심분리기 12,000 rpm 2 분.

(메모: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but decreases the overall DNA yield. 2. 용출된 DNA는 DNA 추출 정제 컬럼에 재적용 가능, centrifuged at 12,000 rpm 2 minutes again, to increase DNA yield.)