대변 ​​총 RNA 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 건조한 상태에서 보관할 수 있습니다. 12 개월. 라이소자임과 프로테이나제 K에는 방부제가 함유되어 있습니다., 실온에서 운송 가능. 장기 보관용, -20°C에서 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

Fecal Total RNA Purification Kit는 대변 및 토사물로부터 total RNA를 빠르고 효율적으로 정제하는 방법을 제공합니다., 그람양성균 추출에 널리 적용 가능, 그람 음성 박테리아, 대변 ​​및 구토물 샘플의 바이러스 RNA.

대변 ​​및 토사물의 불순물과 억제제를 효과적으로 제거하는 키트입니다., 다음과 같은 후속 다운스트림 실험에서 억제 감소 PCR. 추출된 RNA를 바로 PCR에 사용할 수 있습니다., 서던 블로팅, 등. 전체 정제 공정에는 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다., 다양한 시료 유형에 적합한 RNA 정제 키트 만들기.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 사용하기 전에, 규정량의 무수에탄올을 첨가한다. 씻다완충기 1 시약병 라벨에 표시된 대로, 무수 에탄올 첨가를 나타내기 위해 라벨에 체크 표시를 하십시오..

비. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. EDTA가 후속 실험에 영향을 미칠 수 있는 경우, Elution Buffer를 멸균 탈이온수로 대체하는 것이 좋습니다..

1. 샘플 처리 (억제제 제거):

ㅏ: 대변 ​​등 검체를 약 200mg 첨가합니다., 부식산제거시약Ⅰ 1ml를 첨가한다., 철저히 소용돌이 1-2 분, 원심분리기 12,000 rpm 2 분, 그리고 상층액은 버린다.

비: 추출된 샘플이 바이러스 샘플인 경우, 단계로 바로 진행할 수 있습니다. 2. 샘플에 다량의 억제제가 포함되어 있는 경우, 억제제 제거 단계를 먼저 수행하는 것이 좋습니다., 바이러스 핵산의 수율을 감소시킬 수 있지만.

2. 샘플 용해:

ㅏ: 박테리아 샘플에서 핵산 추출용, 추가하다 560버퍼 C 플러스의 μl, 20μl 단백질분해효소 K, 및 20μl 라이소자임 이전 단계의 원심분리 튜브에. 뒤집어서 잘 섞어주세요, 85℃에서 소화 5 분, 튜브를 뒤집어서 6-7 소화 중 시간.

비: 바이러스 샘플에서 핵산 추출용, 추가하다 560버퍼 C 플러스 1μl 및 단백질분해효소 K 20μl. 85℃에서 소화 5 분, 튜브를 뒤집어서 6-7 소화 중 시간.

3. 원심분리기 12,000 rpm 5 분, 상등액을 새로운 원심분리 튜브로 옮긴다 (약 500μl 액체 이송).
4. 동량의 무수에탄올을 첨가한다, 잘 섞는다. 강수량이 발생할 수 있음, 하지만 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다..
5. 얻은 액체를 RNA 정제 컬럼으로 옮깁니다. (매번 약 650-700μl), 실온에서 배양하다 2 분, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 수거된 폐기물을 폐기하다, 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..
6. RNA 정제 컬럼을 새 수집 튜브에 넣습니다., 추가하다 400억제제 제거 버퍼의 μl, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 폐기물을 버리다, 다음 단계를 위해 핵산 정제 컬럼을 튜브에 다시 넣습니다..
7. 추가하다 500세척 완충액의 μl 1RNA 정제 컬럼으로, 원심분리기 14,000 rpm (20,00×g) ~을 위한 2 분, 멤브레인 건조를 보장하기 위해 필요에 따라 원심분리 시간을 연장합니다..

(메모: 에탄올의 존재는 후속 실험에 심각한 영향을 미칩니다., 그래서 멤브레인 건조가 중요합니다. 원심분리 후, 용출 전에 에탄올이 존재하지 않는지 확인하십시오., 그런 다음 폐기물 및 수집 튜브를 폐기하십시오..)

8. RNA 정제 컬럼을 새로운 원심분리기 튜브에 넣습니다., 추가하다 30μl – 50 용출 완충액 μl막에, 실온에서 배양하다 5 분 (15℃-25℃), 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분.

(메모: 30μl의 Elution Buffer를 사용하여 RNA를 용출하면 RNA 농도가 증가할 수 있지만 총 RNA 수율이 감소할 수 있습니다..)

9. 이전 단계를 반복하세요..

(메모: 새로운 원심분리 튜브를 사용하여 두 번째 세척에서 용출된 RNA를 수집하거나 원래 수집 튜브를 계속 사용하여 RNA를 수집할 수 있습니다..)