초순수 RNA 추출 키트 (트리졸)

1. 시약 키트의 구성 요소

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 건조한 환경에서 안정적이며 12 개월. DNase I에는 방부제가 포함되어 있습니다., 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

식물의 신속한 정제를 위해 기존의 TRIzol과 컬럼막 방식을 결합한 RNA 정제 키트입니다., 동물, 조직, 셀, 미생물 RNA, 및 곰팡이 균사 RNA. 대부분의 종에 적합합니다.. 본 RNA 정제 키트는 다음과 같은 식물 조직에 적용할 수 있습니다. 100 mg. 본 키트로 추출한 RNA는 DNA 함량이 극히 낮습니다.. 실험에서 DNA에 대한 민감도가 우려되는 경우, 컬럼에 DNase I 분해를 사용하는 것이 좋습니다..

RNA Fast Purification Kit는 시료에서 total RNA를 추출할 수 있는 제품입니다. (핵 RNA 및 세포질 RNA 포함) 이내에 1 시간. 추출된 RNA를 RT에 바로 활용 가능-PCR, 노던 블로팅, 및 기타 응용 프로그램.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 사용하기 전에, 지정된 양의 무수 에탄올을 첨가하십시오. 씻다완충기 1 시약병의 라벨에 따라, 무수 에탄올이 첨가되었음을 나타내는 라벨의 상자를 선택하십시오..

비. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. EDTA가 후속 실험에 영향을 미치는 경우, Elution Buffer를 멸균 탈이온수로 교체하는 것이 좋습니다..

1. 샘플 처리:

ㅏ. 조직: 신선한 재료를 즉시 사용할 수 없는 경우, 액체질소에 넣고 -80°C에 보관하세요. 건조된 재료는 실온에서 보관 가능. 조직 30~80mg을 액체질소에 갈아서 첨가합니다. 1 ml 트리졸 완충액 균질화를 위해.

비. 단층 배양 세포: 배양 배지를 흡인하고 추가합니다. 1 ml 트리졸 완충액 균질화를 위해.

씨. 세포 현탁액: 세포를 수집하고 추가하는 원심 분리기 1 ml 트리졸 완충액 균질화를 위해.

2. 추가한 후 트리졸 완충액 샘플에, 피펫팅으로 완전히 섞는다, 완전한 샘플 용해 허용, 그리고 실온에서 배양하세요 5 분.

3. 클로로포름을 다음 비율로 첨가하십시오. 200 μl 당 1 ml의 트리졸 완충액, 세게 흔들어 30 초, 그리고 실온에서 배양하세요 2 분.

4. 4°C에서 용해물을 원심분리합니다., 12,000 rpm 10 분. RNA는 상부 수성 상에 존재합니다.

5. 상등액을 조심스럽게 새 원심분리 튜브로 옮깁니다., 중간층과 바닥층의 수집을 피함. (메모: 약 400 μl의 액체를 전송할 수 있습니다., 일부 종에서는 더 적을 수 있습니다..)

6. 동일한 양의 미리 냉각된 무수 에탄올을 추가합니다., 빠르게 섞다. (예를 들어, 추가하다 400 용해물의 μl, 추가하다 400 무수 에탄올 μl. 용해물의 양이 다음보다 적은 경우 400 μl, 비례하여 무수 에탄올의 양을 줄이십시오.. 에탄올을 첨가하면 약간의 침전이 생길 수 있습니다., 하지만 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다..)

7. 얻은 액체를 RNA 정제 컬럼으로 옮깁니다. (약 650-700 μl/회), 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 수거된 폐기물을 폐기하다, 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..

8. 단계 반복 7, 남은 액체를 RNA 정제 컬럼에 추가, 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 폐기물과 수집 튜브를 폐기.

9. RNA 정제 컬럼을 새 수집 튜브에 넣습니다., 추가하다 300 억제제 제거 버퍼의 μl, 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 폐기물을 버리다, 다음 단계를 위해 RNA 정제 컬럼을 튜브에 다시 삽입합니다..

10. 추가하다 80 DNase I의 μlRNA 정제 컬럼에 대한 작업 솔루션, 20°C~30°C에서 배양하세요. 15 분. (DNase I 작업 솔루션 준비: 62 μl RNase가 없는 물, 8 μl 10× 반응 완충액, 그리고 10 μl DNase I, 보충하다 80 μl DNase I 작업 솔루션.)

11. 추가하다 300 억제제 제거 버퍼의 μlRNA 정제 컬럼으로, 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 폐기물을 버리다, 다음 단계를 위해 RNA 정제 컬럼을 튜브에 다시 삽입합니다..

12. 추가하다 700 세척 완충액의 μl 1RNA 정제 컬럼으로, 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분, 더 건조한 멤브레인이 필요한 경우 원심분리 시간을 연장하세요.. (메모: Wash Buffer에 에탄올 첨가 확인 1; 에탄올의 존재는 후속 실험에 큰 영향을 미칩니다. 용출 전 원심분리 후 멤브레인이 건조한지 확인하세요.. 폐기물과 수집 튜브를 폐기하십시오.. Wash Buffer 사용 후 1, RNA 정제 컬럼의 멤브레인은 약간의 색상만 있어야 합니다.. 원심분리 후 RNA 정제 컬럼을 조심스럽게 제거하세요., 에탄올 오염을 방지하기 위해 수집 튜브에 닿지 않도록 하십시오..)

13. RNA 정제 컬럼을 새로운 원심분리기 튜브에 넣습니다., 똑똑 떨어지는 물방울 소리 100 용출 완충액 μl멤브레인 위에, 실온에서 배양하다 5 분 (15°C~25°C), 이상의 속도로 원심분리기를 8,000 rpm 1 분. (메모: RNA 용출 50 μl의 용출 완충액은 RNA 농도를 증가시키지만 총 RNA 수율을 감소시킬 수 있습니다..)

14. 이전 단계를 반복하세요.. (메모: 새로운 원심분리 튜브를 사용하여 두 번째로 용출된 RNA를 수집하거나 원래 수집 튜브를 계속 사용하여 RNA를 수집할 수 있습니다..)