리보뉴클레아제 H, 또는 줄여서 RNase H, DNA에 혼성화된 RNA 가닥의 포스포디에스테르 결합을 특이적으로 가수분해하는 수수께끼 같은 능력을 가진 엔도리보뉴클레아제 효소입니다.. 그 활동이 역설적으로 보이지만, RNase H는 RNA-DNA 하이브리드에서 RNA 부분을 선택적으로 표적으로 삼아 기본적인 세포 과정에서 중요한 역할을 합니다.. 부위별 절단 능력의 폭발적인 특성으로 인해 분자 생물학 기술의 다용도 도구가 됩니다..
여기서는 RNase H가 수행하는 작업을 자세히 살펴보겠습니다., 어떻게 작동하나요?, NEB의 재조합 RNase H 제품의 주요 기능 및 응용, 연구자들이 필요에 맞는 올바른 RNase H 효소를 선택하도록 돕습니다..
RNase H의 기능은 무엇입니까?
RNase H의 주요 기능은 RNA-DNA 이중 가닥의 RNA 가닥을 절단하는 것입니다., DNA 가닥을 그대로 유지. 이 표적화된 RNA 소화는 세포 내부의 DNA와 RNA 거래 중에 형성될 수 있는 RNA-DNA 하이브리드 교차점을 해결하는 데 도움이 됩니다.. RNase H 활성은 DNA 복제와 같은 다양한 DNA 및 RNA 대사 과정에 중요합니다., 전사, 및 오카자키 단편 성숙.
이는 RNA 프라이머가 DNA에 지속되는 것을 방지하고 상보적인 DNA 주형에 혼성화된 RNA 전사물을 제거합니다.. DNA 부분을 보호하면서 RNA 부분을 구체적으로 표적화하고 분해하는 과정은 생체 내에서 핵산 거래를 촉진하는 RNase H 역할의 핵심입니다..
RNase H는 어떻게 작동하고 효소 활동은 무엇입니까?
RNase H는 RNA-DNA 하이브리드 영역을 찾은 다음 3개 사이의 포스포디에스테르 결합을 정확하게 절단함으로써 작동합니다.′-RNA 리보스의 수산기 그룹과 사슬에서 다음 RNA 리보스의 인산 그룹. DNA 가닥의 완전성을 방해하지 않고 산-염기 가수분해 반응을 촉매합니다..
분자 수준에서, RNase H는 RNA-DNA 접합부를 인식하고 이중 구조에 강력하게 결합합니다.. 그 활성 부위는 RNA 가닥의 포스포디에스테르 결합을 하나씩 잘라냅니다.′ 5까지′ 방향. 이 과정은 DNA 파트너에 영향을 주지 않고 전체 RNA 세그먼트가 분해될 때까지 계속됩니다.. 이 표적화된 효소 활성은 RNase H 활성이라고 하며 정의된 조건에서 주어진 기간 내에 RNA-DNA 하이브리드에서 특정 양의 RNA를 절단하는 데 필요한 RNase H의 양으로 정량화됩니다..
NEB RNase H 제품의 주요 특징 및 응용 분야는 무엇입니까??
New England Biolabs(NEB)는 분자생물학 응용 분야를 위한 고품질 효소를 공급하는 선두업체입니다.. 이들의 재조합 RNase H는 여러 가지 유리한 특징을 지닌 정제된 효소입니다.. 넓은 pH 및 온도 범위에서 활성을 지원하기 위해 최적화된 반응 완충액과 함께 제공됩니다.. 재조합 제품으로, 오염물질 없이 배치 간 일관성을 제공합니다..
NEB의 RNase H는 높은 RNase H 기능과 특이성을 나타냅니다., DNA를 방해하지 않고 선택적으로 RNA-DNA 하이브리드의 neb RNase H로 RNA 가닥을 소화합니다.. 역전사와 같은 기술에 응용됩니다. PCR (RT-PCR) RNase H 활성에 의한 첫 번째 가닥 합성 중에 형성된 RNA-cDNA 하이브리드를 해결하는 데 도움이 됩니다.. NEB의 내열성 RNase H는 고온 핵산 응용 분야에도 사용할 수 있습니다..
최적의 RNase H 활동을 위해 필요한 조건과 완충액?
최적의 RNase H 활성을 위해, NEB의 재조합 RNase H에는 특정 반응 조건과 완충 성분이 필요합니다.. 제공된 10X RNase H 반응 버퍼는 다음으로 구성됩니다. 트리스-HCl, KCl, MgCl2, 최대 효소 기능을 위해 올바른 이온 강도와 pH를 유지하는 DTT. RNase H는 pH에서 가장 잘 작동합니다. 8.3 37°C. RNase H 기능은 촉매 활성에 있어 Mg2+에 의존하므로 완충액에 Mg2+ 이온을 포함시키는 것이 중요합니다..
DTT는 효소가 산화되는 것을 방지하는 환원제 역할을 합니다.. RNase H 효소를 결합하여 반응이 설정됩니다., 기질 RNA-DNA 하이브리드 및 1X 농도의 완충액. 적절한 완충은 RNase H 안정성을 향상시키고 하이브리드에서 RNA 부분의 일관된 절단을 향상시킵니다..
RNase H는 어떤 유형의 핵산에 작용하고 작용하지 않습니까??
RNase H는 RNA-DNA 이중나선에서 RNA를 선택적으로 표적으로 삼지만, 단일 가닥 RNA나 DNA를 소화하지 않습니다.. 이중 가닥 DNA도 절단하지 않습니다.. 정확한 효소적 RNase H 활성은 DNA 가닥에 혼성화된 RNA에 특히 중요합니다.. 이 효소는 DNA 파트너의 무결성과 연속성을 방해하지 않고 RNA-DNA 이종이중체의 RNA 부분을 효율적으로 식별하고 분해합니다..
RNase H는 단일 핵산 가닥이나 RNA-DNA 접합이 없는 이중 가닥 DNA 분자에 대해 거의 또는 전혀 활성을 나타내지 않습니다.. 이러한 엄격한 기질 특이성은 다양한 핵산 거래에 필수적인 하이브리드 복합체로부터 제어되고 표적화된 RNA 제거를 가능하게 합니다..
NEB의 재조합 RNase H의 출처와 생산 방법은 무엇입니까??
NEB의 RNase H는 높은 순도와 배치 간 일관성을 위해 대장균에서 재조합 방식으로 생산됩니다.. 복제 소스는 E.coli 세포에 존재하는 내인성 RNase H를 암호화하는 Escherichia coli에서 분리된 기본 RNase H 유전자입니다.. 이 유전자는 발현 벡터에 삽입되어 비병원성 대장균 균주에서 증폭됩니다.. 벡터의 유도는 높은 수준의 재조합 RNase H 단백질 발현을 유도합니다.
과발현된 RNase H는 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 정제되어 오염된 뉴클레아제가 없는 고도로 정제된 제제를 얻습니다.. 품질 관리 검사를 통해 재조합 효소가 진정한 RNase H 활성 및 특이성을 나타냄을 인증합니다.. 최종 제품은 해당 기능에 최적화된 반응 완충액과 함께 공급됩니다..
NEB의 RNase H는 RT-PCR과 같은 분자 생물학 기술에 어떻게 사용됩니까??
RNase H의 중요한 응용 중 하나는 역전사 PCR입니다. (RT-PCR) 첫 번째 가닥 동안 형성된 RNA-cDNA 하이브리드를 해결하는 데 도움이 됩니다. cDNA 합성. RT-PCR에서, RNA 주형은 먼저 상보적인 DNA로 역전사됩니다. (cDNA) DNA 프라이머를 사용하여. 이 과정을 통해 RNA-cDNA 하이브리드 이중나선이 생성됩니다.. 그런 다음 NEB의 재조합 RNase H를 사용하여 이러한 하이브리드의 RNA 가닥을 선택적으로 분해하고 단일 가닥 cDNA만 남깁니다..
원래 RNA 템플릿을 분해하면 후속 PCR 증폭을 방해하는 것을 방지할 수 있습니다.. RNA를 효과적으로 절단함으로써, RNase H를 사용하면 cDNA만 기하급수적으로 증폭하여 특정 RNA 전사물을 검출하고 분석할 수 있습니다.. 최적화된 조건에서 혼성화된 RNA를 분해하는 정밀도와 효율성은 RT-PCR 분석의 품질과 감도를 향상시킵니다..
NEB의 RNase H의 온도 범위와 열 불활성화 지점은 무엇입니까??
NEB의 일반 RNase H는 25~42°C에서 활성화되며 최대 활성은 약 37°C입니다.. 65°C로 가열하면 비가역적으로 비활성화됩니다. 20 분. 더 높은 온도가 필요한 응용 분야용, NEB는 또한 내열성 RNase H 변형도 제공합니다.. 이 내열성 RNase H는 25~80°C에서 완벽하게 기능하며 최대 50~60°C의 높은 온도에서 활성이 증가합니다..
80°C로 가열한 후에도 안정성을 유지합니다., 더 높은 열 순환 조건에서 실행되는 까다로운 핵산 기술에 적합합니다.. 열안정성 RNase H는 열 불활성화 단계와 단백질분해효소 K 처리를 견딜 수 있습니다., 더 많은 유연성 제공. 효과적인 사용을 위해 두 RNase H 버전 모두 광범위한 제품 설명서와 함께 제공됩니다..
NEB에서 일반 RNase H와 열안정성 RNase H 중에서 선택하는 방법?
일반 RNase H와 내열성 RNase H 사이의 선택은 온도 요구 사항과 작업 흐름에 따라 달라집니다.. 일반 RNase H는 반응이 42°C 미만에서 수행될 수 있는 경우 비용 효율적인 옵션입니다., 표준 RT-PCR과 마찬가지로. 내열성 RNase H는 중첩 PCR과 같이 50~80°C의 높은 열 주기와 관련된 기술에 이점을 제공합니다., 역전사 루프 매개 등온 증폭 (RT-램프), 및 기타 열 프로파일링 애플리케이션. 내열 특성은 여러 가열 단계에서 활성 손실을 방지합니다..
고온 핵산 분석을 수행하는 연구원은 내열성 RNase H의 확장된 기능 범위와 내구성의 이점을 누릴 수 있습니다.. 전반적인, NEB의 재조합 RNase H 효소는 광범위한 용도에 걸쳐 RNA-DNA 복합체의 RNA 소화를 제어하기 위한 신뢰할 수 있는 도구를 제공합니다..
요약
결론적으로, 이 블로그 게시물은 RNase H가 무엇인지 포괄적으로 설명하기 위한 것입니다., 구체적으로 어떻게 작동하는지, NEB의 재조합 RNase H 제품의 주요 특성, 최적의 반응 조건, RT-PCR과 같은 기술의 응용, 올바른 RNase H 효소 선택을 위한 고려사항.
간단하면서도 상세한 방식으로 흥미로운 효소 활성과 표적 RNA 절단 능력을 탐구합니다., 이것이 다용도 RNase H와 핵산 거래에서 중요한 역할에 대해 더 많은 정보를 제공하는 데 도움이 되기를 바랍니다.. 다른 측면에 대해 더 자세한 설명이 필요한 경우 알려주시기 바랍니다..
