Агароза, гелеобразное вещество, полученное из морских водорослей, стал незаменимым инструментом в молекулярная биология лаборатории по всему миру. Но что такое агароза?, и почему это так широко используется? Мы изучим основы агарозы, включая его состав, ключевые приложения, и значение.
Агароза представляет собой полисахаридный полимер, образующий пористый гель при растворении в кипящей воде или буферных растворах.. Гели имеют переменный размер пор в зависимости от концентрации агарозы., позволяющий разделять биологические молекулы по размеру.
Наиболее распространенное применение агарозы — в качестве матрицы для гель-электрофореза., используется для разделения заряженных молекул, таких как ДНК, РНК, и белки путем приложения электрического поля к гелю.. The pores created in the gel act like a molecular sieve – smaller molecules can pass through easily and travel farther towards the oppositely charged electrode, в то время как более крупным сложнее перемещаться по матрице. Это обеспечивает точное разделение по размеру..
Агарозные гели, используемые для электрофореза, обычно 0.2% к 3% агароза. The concentration can be optimized to the fragment sizes being analyzed – lower percentages for resolving larger fragments and higher percentages for better separation of smaller fragments. Маркеры молекулярной массы ДНК и РНК, содержащие известные размеры фрагментов, анализируются вместе с образцами, чтобы обеспечить приблизительное определение размера..
Агарозные гели оптически прозрачны., облегчая визуализацию разделенных биологических молекул с использованием методов окрашивания, таких как бромистый этидий.. Ими также можно манипулировать без ущерба., возможность восстановления разделенных биомолекул. Отсутствие связывания с белками и общая инертность обеспечивают идеальную среду для чувствительного аналитического разделения и характеристики нуклеиновых кислот и белков..
Агароза состоит из повторяющихся субъединиц агарозы, состоящих из сахаров галактозы.. Длинные цепи молекул агарозы соединяются посредством водородных связей, образуя спиральные структуры, которые собираются в сверхспиральные пучки., создание пор при застывании геля. Altering the concentration of agarose changes the pore size – using higher percentages results in smaller pores to better separate tiny molecules.
Агарозу получают из агара, желеобразное вещество, естественным образом присутствующее в клеточных стенках некоторых видов красных водорослей, таких как Gelidium и Gracilaria.. Его экстрагируют и очищают из агара посредством ряда стадий, включающих фильтрацию растворителем., атмосферные осадки, и ионообменная хроматография. В результате образуется нейтральная полисахаридная фракция, состоящая из агарозы и небольшого количества агаропектина..
Коммерческое производство агарозы обычно начинается с промывки и измельчения биомассы красных морских водорослей., с последующими несколькими этапами экстракции горячей водой или щелочным раствором. Затем экстракт очищают от солей., белки, и другие соединения. Контролируемый гидролиз превращает очищенный агар во фракцию агарозы., который подвергается дальнейшей глубокой очистке с получением порошков агарозы исследовательского или аналитического качества..
Порошки агарозы состоят из мелкоизмельченных частиц, которые легко растворяются в кипящих водных растворах.. Они доступны в различных электроэндосмосах. (РЭО) сорта в зависимости от предполагаемого применения. Порошок агарозы с низким содержанием ЭЭО обычно используется для разделения биомолекул, таких как нуклеиновые кислоты и белки.. Добавки часто включаются в готовые агарозные гели..
Состав и концентрация агарозного геля влияют на его физические свойства, включая размер пор., прочность геля, и производительность разделения. Концентрация агарозы является основным фактором, определяющим размер пор., в то время как введение заместителей, таких как метильные или гидроксиэтильные группы, влияет на стабильность геля.. Добавки, такие как сахар, влияют на вязкость и проводимость.. Все эти взаимозависимые факторы должны быть сбалансированы для достижения оптимального разрешения..
Агарозные гели оптимизируют эффективность разделения биологических молекул, обеспечивая при этом простоту приготовления., загрузка, и обработка. Нетоксичная и неденатурирующая среда сохраняет целостность образца.. Гибкость в управлении концентрацией агарозы обеспечивает хороший баланс между скоростью разделения и разрешением в широком диапазоне размеров.. Отсутствие электроосмотического потока и отсутствие поверхностной адсорбции являются дополнительными преимуществами по сравнению с другими матрицами..
Восстановление неповрежденных макромолекул из агарозных гелей позволяет использовать множество последующих приложений.. Безрадикальная очистка защищает деликатные молекулы, а прозрачность позволяет легко документировать гель. Эти полезные характеристики объясняют постоянное широкое использование электрофореза в агарозном геле..
В дополнение к повсеместному электрофорезу в агарозном геле, агароза имеет множество применений в биотехнологии и медицине.:
Характерная низкая токсичность, термическая стабильность, и щадящие условия обращения с агарозными гелями значительно способствовали чувствительному аналитическому разделению., характеристика, и манипулирование жизненно важными биомолекулами. Технологические достижения продолжают открывать новые возможности применения, основанные на уникальных химических и физических свойствах этого экстракта морских водорослей..
Вот некоторые преимущества использования агарозы в лабораториях.:
От ДНК-отпечатков пальцев в криминалистике до точной медицинской аналитики, агароза стала повсеместно использоваться в современной молекулярной биологии и биотехнологии.. Универсальная полисахаридная среда позволяет проводить электрофоретический анализ нуклеиновых кислот и белков с высоким разрешением.. Заглядывая вперед, надежные и доступные системы агарозного геля, а также новые наноструктурированные конфигурации будут продолжать способствовать ключевым открытиям, позволяя углубленно изучать фундаментальные биомолекулы, лежащие в основе сложностей жизни..
я. Objective Learn and master the basic principles and detection methods of Restriction Fragment Length…
In 1974, Evans first combined chromosome banding techniques with in situ hybridization to improve localization…
Introduction of Situ PCR In scientific research, the establishment of each new technology brings forth…
With the development of molecular biology techniques, various methods for detecting gene structures and mutations…
Introduction AFLP is a DNA molecular marker technology that detects DNA polymorphism by restricting the…
In-situ PCR, or in-situ polymerase chain reaction, is a technique used in scientific research. Each…