Набор для экстракции ДНК бактериального генома

• Компоненты набора реагентов

• Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. Лизоцим, Протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты., возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

• Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

• Знакомство с набором реагентов

This kit provides a rapid and effective purification method for isolating DNA from various bodily fluids and bacterial culture fluids. It utilizes a silicon-based purification column that selectively adsorbs nucleic acids. With specific buffer solutions, bacterial DNA samples can be extracted within 30 минуты. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа.. The extracted DNA can be directly used for downstream experiments like ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие.

• Экспериментальные принципы и процедуры

• Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

1. Reagent Buffer B and C может выпадать в осадок в условиях низких температур. Мы рекомендуем нагревать при температуре 65℃для 5 минуты. После растворения осадка, его можно использовать нормально.
2. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в Промывной буфер 1как указано на этикетке бутылки. Отметьте галочкой на этикетке, что указано добавление безводного этанола..
3. Элюирующий буфер представляет собой0.1х ТЕ решениесодержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..
4. Sample Handling:
5. Take around 1 ml of bacterial culture, центрифуга в 12,000 об/мин для 1 минута, аспирируйте как можно больше супернатанта, добавлять 200μl of Reagent Buffer Bto the bacterial cell solution. В целом, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, добавлять 10μl of RNaseA (10мг/мл) to the mixture, incubate at 37°C for 2 minutes with vortexing during the period.
6. If the sample being processed contains Gram-positive bacteria, добавлять 10μl of Lysozyme (10 мг/мл)и 200μl of Reagent Buffer B. В целом, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, добавлять 10μl of RNaseA (10мг/мл) to the mixture, incubate at 37°C for 15-30 minutes with vortexing during the period.
7. Добавлять 10μl of Proteinase K (10 мг/мл), thoroughly invert and mix, digest at 65°C for 2 минуты. During this period, invert and mix the sample solution 6-7 times until the sample solution becomes clear after digestion.
8. Добавлять 200μl of Reagent Buffer Cto the lysate and mix. Если появился белый осадок, it can be left to settle; it won’t affect subsequent experiments once the precipitate disappears.
9. Добавлять 200μl of ethanol, тщательно перемешать. Some precipitation might occur but won’t affect subsequent experiments.
10. Transfer the obtained liquid into a DNA extraction purification column, leave at room temperature for 2 минуты, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
11. Добавлять 600мкл промывочного буфера 1, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, discard the waste, and reinsert the DNA extraction purification column into the holder.

(Примечание: Ensure ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1 в колонку очистки экстракции ДНК, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты, extending the centrifugation time as needed for a drier membrane.
8. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (holder) в новую центрифужную пробирку, open, and heat at 65°C for 2 минуты. Extend this step as necessary to evaporate ethanol, preventing ethanol residues from affecting downstream experiments.
9. Добавлять 50-100мкл элюирующего буфераonto the column membrane, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Eluting DNA with 50 μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce the total DNA yield. 2. The eluted DNA from the eluate can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifuge again at 12,000 об/мин для 2 minutes to enhance DNA yield.)