Набор для экстракции ДНК бактериального генома

• Компоненты набора реагентов

• Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. Лизоцим, Протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты., возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

• Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

• Знакомство с набором реагентов

Этот набор обеспечивает быстрый и эффективный метод очистки для выделения ДНК из различных жидкостей организма и бактериальных культуральных жидкостей.. В нем используется очищающая колонка на основе кремния, которая избирательно адсорбирует нуклеиновые кислоты.. Со специальными буферными растворами, Образцы бактериальной ДНК можно извлечь в течение 30 минуты. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа.. Извлеченная ДНК может быть непосредственно использована для последующих экспериментов, таких как ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие.

• Экспериментальные принципы и процедуры

• Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

1. Реагентный буфер B и C может выпадать в осадок в условиях низких температур. Мы рекомендуем нагревать при температуре 65℃для 5 минуты. После растворения осадка, его можно использовать нормально.
2. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в Промывной буфер 1как указано на этикетке бутылки. Отметьте галочкой на этикетке, что указано добавление безводного этанола..
3. Элюирующий буфер представляет собой0.1х ТЕ решениесодержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..
4. Обработка образцов:
5. Возьмите вокруг 1 мл бактериальной культуры, центрифуга в 12,000 об/мин для 1 минута, аспирируйте как можно больше супернатанта, добавлять 200мкл реагентного буфера Bв раствор бактериальных клеток. В целом, остаточная РНК оказывает минимальное влияние на последующие эксперименты. Если необходимо устранить помехи РНК, добавлять 10мкл РНКазы А (10мг/мл) к смеси, инкубировать при 37°С в течение 2 минут с встряхиванием в течение периода.
6. Если обрабатываемый образец содержит грамположительные бактерии, добавлять 10мкл лизоцима (10 мг/мл)и 200мкл реагентного буфера B. В целом, остаточная РНК оказывает минимальное влияние на последующие эксперименты. Если необходимо устранить помехи РНК, добавлять 10мкл РНКазы А (10мг/мл) к смеси, инкубировать при 37°С в течение 15-30 минут с встряхиванием в течение периода.
7. Добавлять 10мкл протеиназы К (10 мг/мл), тщательно перевернуть и перемешать, переваривать при 65°С в течение 2 минуты. В этот период, переверните и перемешайте раствор образца 6-7 раз, пока раствор образца не станет прозрачным после расщепления.
8. Добавлять 200мкл реагентного буфера Cк лизату и перемешать. Если появился белый осадок, это можно оставить на саморегулирование; это не повлияет на последующие эксперименты после исчезновения осадка.
9. Добавлять 200мкл этанола, тщательно перемешать. Могут выпасть небольшие осадки, но они не повлияют на последующие эксперименты..
10. Перенесите полученную жидкость в колонку для экстракционной очистки ДНК., оставить при комнатной температуре на 2 минуты, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды. Выбросьте собранные отходы и повторно вставьте пробирку для сбора в колонну очистки для следующего шага..
11. Добавлять 600мкл промывочного буфера 1, центрифуга в 12,000 об/мин для 30 секунды, выбросить отходы, и снова вставьте колонку для экстракционной очистки ДНК в держатель..

(Примечание: Убедитесь, что этанол добавлен в промывочный буфер. 1.)

7. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1 в колонку очистки экстракции ДНК, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты, увеличение времени центрифугирования по мере необходимости для более сухой мембраны.
8. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (держатель) в новую центрифужную пробирку, открыть, и нагреваем при температуре 65°С в течение 2 минуты. При необходимости продлите этот шаг для испарения этанола., предотвращение влияния остатков этанола на последующие эксперименты.
9. Добавлять 50-100мкл элюирующего буферана мембрану колонки, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Элюирование ДНК с помощью 50 мкл элюционного буфера может увеличить концентрацию ДНК, но снизить общий выход ДНК.. 2. Элюированная ДНК из элюата может быть повторно нанесена на колонку для экстракционной очистки ДНК., снова центрифугировать в 12,000 об/мин для 2 минут для увеличения выхода ДНК.)