Этот продукт необходимо упаковать в мешки со льдом и отправить через FedEx или UPS..
Внедрение продукции：
Этот набор реагентов может выполнять амплификационное обнаружение консервативных генов вируса птичьей полиомы. (АПВ) в таких образцах, как птица перья, кровь, ткани, мазки из полости рта/генитальных органов, и т. д.. Путем введения эндогенной внутренней ссылки, процесс экстракции и амплификации нуклеиновой кислоты можно контролировать, чтобы гарантировать точность результатов теста.
Содержание продукта：
| Компоненты реагента | AP2304001-01（24T） | AP2304001-02（48T） |
| Реакционный раствор АПВ | 23мкл/лунка×8 лунок/стрип×3 стрипа | 23мкл/лунка×8 лунок/стрип×6 полосок |
| APV Положительный контроль | 100мкл | 100мкл |
| Отрицательный контроль | 100мкл | 100мкл |
Условия хранения：
Хранить при -20℃, срок годности не менее 12 месяцы
Экспериментальная эксплуатация：
1. Базовые приготовления (Зона подготовки проб)
1.1 Образцы требований：
- Перья: Соберите минимум 5 перья из груди, брюшная полость, или ноги (включая часть стержня пера), и не используйте перья, потерявшие естественным путем.
- Кровь: Используйте ЭДТА в качестве антикоагулянта., не используйте гепарин в качестве антикоагулянта. Следует использовать свежую цельную кровь., или его можно хранить при температуре 2 ~ 8 ℃ до 7 дни, или хранить при -20℃ до 3 месяцы. По возможности избегайте повторного замораживания и оттаивания..
- Салфетка: Возьмите свежие мышцы или ткани органов. (избегайте использования образцов с кожей, сухожилия, или фасции, которые трудно обрабатывать) не более 100 мг. Приготовьте гомогенат ткани, используя 200–500 мкл стерильной воды., а затем приступайте к последующей подготовке проб.
1.2 Базовые приготовления：
- Обратитесь к руководству компании Three Lions Biotech. “Набор для быстрого извлечения геномной ДНК животных (для ПЦР анализ)” (номер части: ДП202), или другие наборы/методы для экстракции нуклеиновых кислот, отвечающие соответствующим требованиям., для извлечения обработанных образцов.
- Поместите извлеченный образец нуклеиновой кислоты в холодильник и постарайтесь незамедлительно приступить к тестированию..
- Его можно хранить при температуре 4°C до 7 дней или при температуре -20°C до 6 месяцы.
2 . Подготовка реакционной системы (Зона реакции для добавления образцов).
2.1 Достаньте n+2 реакционные пробирки, содержащие положительный контроль APV., APV отрицательный контроль, и реакционный раствор, необходимый для эксперимента (n представляет количество образцов, подлежащих тестированию., плюс 1 положительный контроль, и 1 отрицательный контроль). Полностью разморозьте реагенты при комнатной температуре., центрифуга для 10 секунды, и вращайте жидкость внутри стенок и крышек пробирки до дна пробирки.. Поместите их в холодильник для дальнейшего использования..
2.2 Затем, добавьте 2 мкл отрицательного контроля, выделенная нуклеиновая кислота образца, и положительный контроль APV в реакционный раствор последовательно. Закройте крышки трубок, делать правильные записи, и убедитесь, что общий объем каждой реакции составляет 25 мкл.. Тщательно перемешайте содержимое, центрифуга для 10 секунды, а затем приступить к эксперименту по амплификации на приборе ПЦР.
3. ПЦР-амплификация (Зона амплификации и анализа продуктов).
- Процесс ПЦР-амплификации выглядит следующим образом.:
- Предварительная денатурация при 95℃ для 3 минуты.
- Денатурация при 95℃ для 10 секунды.
- Отжиг и удлинение при 60℃ для 40 секунды, на общую сумму 35 циклы.
- Собирайте сигналы флуоресценции при 60 ℃..
- При обнаружении флуоресценции, выберите FAM для первого канала (для специфического гена APV), и выберите VIC/HEX для второго канала (для эндогенного эталонного гена).
- При использовании прибора для количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени серии ABI, вы можете заранее связаться с производителем или при необходимости добавить калибровочный краситель ROX самостоятельно.; в противном случае, следуйте обычной процедуре.
4. Определение результата
4.1
- Если значения Ct положительного контроля как в канале FAM, так и в канале VIC/HEX равны <30 и покажи “С”-фигурная кривая усиления, и отрицательный контроль не имеет значения Ct или значения Ct ≥35 и нет “С”-фигурная кривая усиления, результат эксперимента действителен.
- В противном случае, эксперимент следует повторить, и если повторный эксперимент по-прежнему недействителен, пожалуйста, свяжитесь с техническим персоналом.
4.2
- Значение Ct образца в канале VIC/HEX должно быть ≤32 и показывать “С”-фигурная кривая усиления, что указывает на то, что экстракция и амплификация образца эффективны.
- Если значение Ct отсутствует или значение Ct 32 < Ct ≤ 35 в канале VIC/HEX, это указывает на то, что экстракция нуклеиновой кислоты образца не соответствует стандарту или имеется сильное влияние ингибирования. (например, остатки алкоголя или дезинфицирующих средств, антикоагулянты, и т. д.) что препятствует усилению.
- Рекомендуется повторно обработать образец для выделения и амплификации нуклеиновых кислот..
4.3 После обнаружения в канале VIC/HEX действительно, определение в канале FAM выполняется следующим образом:
- Значение Ct ≤ 32 и “С”-наблюдается фигурная кривая усиления, он определяется как положительный для APV, что указывает на присутствие вируса APV в образце.
- Значение Ct 32 < Кт < 35, это считается подозрительным, и образец должен быть повторно протестирован (путем повторной экстракции и тестирования нуклеиновой кислоты, предлагается сначала исключить “ложно положительный” результаты, вызванные аэрозольным загрязнением окружающей среды). Если повторная проверка в канале FAM после исключения аэрозольного загрязнения показывает значение Ct < 35 и четкая кривая усиления, он определяется как положительный для APV; в противном случае, он определяется как отрицательный.
- Нет значения Ct или значение Ct ≥ 35 и нет “С”-фигурная кривая усиления, он определяется как отрицательный для APV, что указывает на то, что вирус APV не был обнаружен в образце.
Меры предосторожности：
- Чтобы предотвратить загрязнение, эксперимент следует проводить строго с секционированными операциями. Предпочтительно иметь физическую изоляцию между перегородками, чтобы избежать перекрестного загрязнения, вызванного человеческим фактором.. Во время эксперимента надевайте лабораторные халаты и латексные перчатки., и использовать отдельные инструменты в разных областях. При необходимости меняйте перчатки и лабораторные халаты.. После ПЦР, не открывайте крышки сразу. Прежде чем открывать для отбора проб, дождитесь достаточного охлаждения, чтобы свести к минимуму аэрозольное загрязнение..
- Полностью разморозьте реагенты перед использованием., но избегайте многократного замораживания и оттаивания. Строго следуйте инструкциям по приготовлению реагента., образец добавления, и другие шаги. Верстак, центрифуга, пипетки, и другие инструменты необходимо регулярно дезинфицировать хлорсодержащими дезинфицирующими средствами., спирт этиловый, агенты для удаления загрязнений нуклеиновыми кислотами, или ультрафиолетовые лампы.
- Отрицательный результат не обязательно означает, что это мужчина.. Неизвестные мутации, плохое качество образца, низкая концентрация, или наличие сильных ингибирующих веществ при экстракции нуклеиновой кислоты (тестирование) также может привести к “отрицательный” Результаты. Этот набор используется только для специфической амплификации гена CHD-W у попугаев.. Для других продуктов, пожалуйста, проконсультируйтесь с производителем.
- Этот продукт предназначен только для одноразового использования.. Не подвергайте многократному замораживанию и оттаиванию. Он предназначен только для целей научных исследований и не должен использоваться для клинической диагностики или других целей..
