Набор для извлечения геномной ДНК из мазков из полости рта

1. Компоненты набора реагентов

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

4. Знакомство с набором реагентов

The Oral Swab Очистка ДНК Kit provides a rapid and efficient method for purifying DNA from oral swabs, widely used for the extraction of epithelial cells such as oral epithelium.

The Oral Swab DNA Rapid Purification Kit can extract total DNA from oral epithelial cells within 30 минуты. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа.. Выделенная ДНК может быть непосредственно использована для ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие приложения.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

А. Реагентный буфер B и C может выпадать в осадок в условиях низких температур. Мы рекомендуем нагревать при температуре 65℃для 5 минуты. После растворения осадка, его можно использовать нормально.

Б. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в Промывной буфер 1как указано на этикетке бутылки. Отметьте галочкой на этикетке, что указано добавление безводного этанола..

С. Элюирующий буфер представляет собой0.1х ТЕ решениесодержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..

1. Обработка образцов:
2. Sampling: Take a sterilized cotton swab, insert it into the mouth, rub against the inner cheek back and forth for more than 20 раз.
3. Use scissors to cut the head of the cotton swab, place it into a 2 центрифужная пробирка мл, and add 400мкл Реагент Buffer B.
4. Добавлять10мкл протеиназы К (10 мг/мл) and 10μl RNase A (10 мг/мл), invert thoroughly, incubate at 65°C for 20 минуты, vortex for 10 seconds during incubation.
5. Добавлять 400мкл Реагент Buffer Cк лизату, vortex thoroughly.
6. Добавлять 200μl of pre-chilled absolute ethanol, хорошо перемешать; precipitation may occur, but it will not affect subsequent experiments.
7. Transfer the obtained liquid into a DNA extraction and purification column (набор) (approximately 650~700μl each time), центрифуга в >8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранную отработанную жидкость, and reinsert the collection tube into the DNA extraction and purification column (набор) для следующего шага.
8. Place the DNA extraction and purification column (набор) into a collection tube, добавлять 300мкл промывочного буфера 1, центрифуга в >8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отработанную жидкость, and reinsert the DNA extraction and purification column (набор) into the tube for the next step.

(Примечание: Ensure that absolute ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1to the DNA extraction and purification column (набор), центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane further.
8. Place the DNA extraction and purification column (набор) в новую центрифужную пробирку, открыть крышку, incubate at 65°C for 2 минуты; this step can be extended appropriately to evaporate ethanol as much as possible, preventing residual ethanol from affecting downstream experiments.
9. Elute 100мкл элюирующего буферана мембрану, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Eluting DNA with 50μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but decrease total DNA yield; 2. Eluted DNA in the eluate can be reapplied to the DNA extraction and purification column, снова центрифугировать в 12,000 об/мин для 2 minutes to increase DNA yield.)