Примечание: Этот продукт необходимо упаковать в мешки со льдом и отправить через FedEx или UPS..
Он прибудет в течение 7-10 дни. Стоимость доставки включена в стоимость товара.
Внедрение продукции：
Этот тестовый набор предназначен для амплификации и обнаружения консервативного гена вируса болезни клюва и перьев попугаев. (ПБФДВ) в таких образцах, как перья птиц, кровь, ткани, мазки из полости рта, и клоакальные мазки. Введение эндогенной внутренней ссылки, позволяет контролировать процессы экстракции и амплификации нуклеиновых кислот, обеспечение точности результатов обнаружения.
Содержание продукта：
| Компоненты реагента | AP2304002-01（24T） | AP2304002-02（48T） |
| Реакционный раствор PBFDV | 23мкл/лунка×8 лунок/стрип×3 стрипа | 23мкл/лунка×8 лунок/стрип×6 полосок |
| PBFDV Положительный контроль | 100мкл | 100мкл |
| Отрицательный контроль | 100мкл | 100мкл |
Условия хранения：
Хранить при -20℃, срок годности не менее 12 месяцы
Экспериментальная эксплуатация：
1. Базовые приготовления (Зона подготовки проб)
1.1 Образцы требований：
Перья: Соберите минимум 5 перья из груди, брюшная полость, или ноги (включая часть стержня пера), и не используйте перья, потерявшие естественным путем.
Кровь: Используйте ЭДТА в качестве антикоагулянта., не используйте гепарин в качестве антикоагулянта. Следует использовать свежую цельную кровь., или его можно хранить при температуре 2 ~ 8 ℃ до 7 дни, или хранить при -20℃ до 3 месяцы. По возможности избегайте повторного замораживания и оттаивания..
Салфетка: Возьмите свежие мышцы или ткани органов. (избегайте использования образцов с кожей, сухожилия, или фасции, которые трудно обрабатывать) не более 100 мг. Приготовьте гомогенат ткани, используя 200–500 мкл стерильной воды., а затем приступайте к последующей подготовке проб.
1.2 Базовые приготовления：
Пожалуйста, обратитесь к руководству компании Three Lions Biotech. “Набор для быстрого извлечения геномной ДНК животных (для ПЦР анализ)” (номер части: ДП202), или другие наборы/методы для экстракции нуклеиновых кислот, отвечающие соответствующим требованиям., для извлечения обработанных образцов. Поместите извлеченный образец нуклеиновой кислоты в холодильник и постарайтесь незамедлительно приступить к тестированию.. Его можно хранить при температуре 4°C до 7 дней или при температуре -20°C до 6 месяцы.
2 . Подготовка реакционной системы (Зона реакции для добавления образцов).
2.1 Удалить n+2 реакционные пробирки (n представляет количество тестовых образцов) содержащий положительный контроль PBFDV, отрицательный контроль, и необходимый реакционный раствор PBFDV. Полностью разморозьте реагенты при комнатной температуре., центрифуга для 10 секунды, а затем центрифугируйте жидкость внутри стенок пробирки и крышек до дна.. Храните пробирки в холодильнике для дальнейшего использования..
2.2 Добавьте 2 мкл отрицательного контроля., выделенная нуклеиновая кислота образца, и положительный контроль PBFDV последовательно с реакционным раствором. Плотно закройте крышки пробирок, сделать необходимые записи, и убедитесь, что общий объем каждой реакции составляет 25 мкл.. Тщательно перемешайте содержимое и центрифугируйте для 10 seconds before conducting the amplification experiment on the ПЦР-машина.
3. ПЦР-амплификация (Зона амплификации и анализа продуктов).
Процесс ПЦР-амплификации выглядит следующим образом.: Предварительная денатурация при 95℃ для 3 минуты; Денатурация при 95℃ для 10 секунды, Отжиг и удлинение при 60℃ для 40 секунды, на общую сумму 35 циклы. Собирайте сигналы флуоресценции при 60 ℃.. При обнаружении флуоресценции, выберите FAM для первого канала (для APV-специфического гена), и выберите VIC/HEX для второго канала (для эндогенного эталонного гена). При использовании прибора для количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени серии ABI, вы можете заранее связаться с производителем или при необходимости добавить калибровочный краситель ROX самостоятельно.; в противном случае, следуйте обычной процедуре.
4. Определение результата
4.1 Если значения Ct положительного контроля как в канале FAM, так и в канале VIC/HEX равны <30 и покажи “С”-фигурная кривая усиления, и отрицательный контроль не имеет значения Ct или значения Ct ≥35 и нет “С”-фигурная кривая усиления, результат эксперимента действителен. В противном случае, эксперимент следует повторить, и если повторный эксперимент по-прежнему недействителен, пожалуйста, свяжитесь с техническим персоналом.
4.2 Значение Ct образца в канале VIC/HEX должно быть ≤32 и показывать “С”-фигурная кривая усиления, что указывает на то, что экстракция и амплификация образца эффективны. Если значение Ct отсутствует или значение Ct 32 < Ct ≤ 35 в канале VIC/HEX, это указывает на то, что экстракция нуклеиновой кислоты образца не соответствует стандарту или имеется сильное влияние ингибирования. (например, остатки алкоголя или дезинфицирующих средств, антикоагулянты, и т. д.) что препятствует усилению. Рекомендуется повторно обработать образец для выделения и амплификации нуклеиновых кислот..
4.3 После обнаружения в канале VIC/HEX действительно, определение в канале FAM выполняется следующим образом:
- Значение Ct ≤ 32 и “С”-наблюдается фигурная кривая усиления, он определяется как положительный для APV, что указывает на присутствие вируса APV в образце.
- Значение Ct 32 < Кт < 35, это считается подозрительным, и образец должен быть повторно протестирован (путем повторной экстракции и тестирования нуклеиновой кислоты, предлагается сначала исключить “ложно положительный” результаты, вызванные аэрозольным загрязнением окружающей среды). Если повторная проверка в канале FAM после исключения аэрозольного загрязнения показывает значение Ct < 35 и четкая кривая усиления, он определяется как положительный для APV; в противном случае, он определяется как отрицательный.
- Нет значения Ct или значение Ct ≥ 35 и нет “С”-фигурная кривая усиления, он определяется как отрицательный для APV, что указывает на то, что вирус APV не был обнаружен в образце.
Меры предосторожности：
1）Чтобы предотвратить загрязнение, эксперимент следует проводить строго с секционированными операциями. Предпочтительно иметь физическую изоляцию между перегородками, чтобы избежать перекрестного загрязнения, вызванного человеческим фактором.. Во время эксперимента надевайте лабораторные халаты и латексные перчатки., и использовать отдельные инструменты в разных областях. При необходимости меняйте перчатки и лабораторные халаты.. После ПЦР, не открывайте крышки сразу. Прежде чем открывать для отбора проб, дождитесь достаточного охлаждения, чтобы свести к минимуму аэрозольное загрязнение..
2）Перед использованием полностью разморозьте реагенты., но избегайте многократного замораживания и оттаивания. Строго следуйте инструкциям по приготовлению реагента., образец добавления, и другие шаги. Верстак, центрифуга, пипетки, и другие инструменты необходимо регулярно дезинфицировать хлорсодержащими дезинфицирующими средствами., спирт этиловый, агенты для удаления загрязнений нуклеиновыми кислотами, или ультрафиолетовые лампы.
3）Отрицательный результат не обязательно означает, что мужчина. Неизвестные мутации, плохое качество образца, низкая концентрация, или наличие сильных ингибирующих веществ при экстракции нуклеиновой кислоты (тестирование) также может привести к “отрицательный” Результаты. Этот набор используется только для специфической амплификации гена CHD-W у попугаев.. Для других продуктов, пожалуйста, проконсультируйтесь с производителем.
4）Этот продукт предназначен только для одноразового использования.. Не подвергайте многократному замораживанию и оттаиванию. Он предназначен только для целей научных исследований и не должен использоваться для клинической диагностики или других целей..
