Голубиный цирковирус (ПиCV) Набор для тестирования нуклеиновых кислот

предмет номер：AP2308003 Спецификация：24Т/48Т Хранилище：-20℃

Внедрение продукции：

Голубиный цирковирус (ПиCV) is an immunosuppressive pathogen and is one of the important pathogens causing pigeon squab disease syndrome. It can accelerate replication in proliferating cells and immune system cells, leading to a low lymphocyte ratio, decreased immunity, and damage to the pigeon immune system. This can result in secondary infections by other pathogens. Поэтому, рано, стремительный, and convenient detection of PiCV is crucial for diagnosis, замедление распространения заболевания, и предотвращение осложнений. This test kit is designed based on the conserved sequences in the PiCV gene, с оптимизированными условиями, обеспечивая точные количественные флуоресцентные ПЦР тестирование орального, клоакальные мазки, кровь, и другие образцы тканей птиц. This allows for a quick determination of whether the host is infected with PiCV.

Содержание продукта：

Условия хранения：

Хранить при -20℃, срок годности не менее 12 месяцы.

Экспериментальная эксплуатация：

1. Базовые приготовления (Зона подготовки проб)

1.1 Образцы требований:

– Мазки из полости рта и клоаки: Возьмите стерильный ватный тампон., вставьте его в горло или клоаку птицы, повернуть три раза, поместите его в центрифужную пробирку, отрезать открытую часть, плотно закройте крышку, и пометить это. Образцы, которые можно быстро протестировать, следует хранить при температуре 2–8°C в течение 24 часы, и образцы, которые невозможно протестировать быстро, следует хранить при температуре -20°C..

– Цельная кровь: Используйте ЭДТА в качестве антикоагулянта., избегайте гепаринового антикоагулянта, используйте свежую цельную кровь, или хранить при температуре 2–8°C не более 7 дни, или хранить при температуре -20°C не более 3 месяцы, избегать повторных циклов замораживания-оттаивания.

– Салфетка: Возьмите свежую мышечную или органную ткань в количестве не более 100 мг., используйте 200-500 мкл стерильной воды для приготовления гомогената ткани, и приступаем к последующей подготовке проб.

1.2 Базовые приготовления:

Обратитесь к SanshiBio. “Набор для быстрого извлечения геномной ДНК животных (для ПЦР-анализа)” руководство (Каталог: ДП202), или другие наборы/методы для экстракции нуклеиновых кислот, отвечающие соответствующим требованиям., для экстракции нуклеиновых кислот из обработанных образцов. Поместите извлеченный образец нуклеиновой кислоты в холодильник и проверьте как можно скорее.. Хранить при температуре 4°C не более 7 суток или при температуре -20°С не более 6 месяцы.

2. Подготовка реакционной системы (Зона реакции)

2.1 Достаньте каждый компонент комплекта., полностью оттаять при комнатной температуре, центрифуга для 10 секунды, и центрифугируйте жидкость внутри стенки пробирки и крышки пробирки до дна пробирки.. Приготовьте реакционный раствор в соответствии с количеством образца. (п+2, где n — количество выборок, рекомендуется установить 1 положительный контроль и 1 отрицательный контроль для каждого эксперимента). Особый метод приготовления: Брать (п+2) reaction tubes containing PiCV premix solution, добавьте в каждую пробирку по 11,5 мкл реакционного раствора PiHV., используйте пипетку, чтобы тщательно перемешать, 23мкл на лунку, и хранить в холодильнике.

2.2 Затем последовательно добавьте 2 мкл отрицательного контроля., выделенная нуклеиновая кислота образца, and PiCV positive control to the reaction solution. Закройте крышку тюбика, сделать запись, а общий объем каждой реакции составляет 25 мкл.. Тщательно перемешать, центрифуга для 10 секунды, и проводить эксперименты по амплификации на приборе ПЦР.

3. ПЦР-амплификация (Область амплификации и анализа продуктов)

Предварительная денатурация при 95°C для 2 минуты; Денатурация при 95°C для 10 секунды, отжиг и удлинение при 60°C для 35 секунды, 40 циклы. Соберите сигналы флуоресценции при 60 ° C.. Выберите канал флуоресценции FAM. (использовать инструменты количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени, такие как серия ABI, если необходимо, обратитесь к производителю или добавьте корректирующий краситель ROX; в противном случае, следовать обычным процедурам).

4. Интерпретация результата

4.1 Условия достоверности эксперимента:

Значение Ct канала FAM положительного управления < 28 и “С”-наблюдается фигурная кривая усиления; отрицательный контроль не имеет значения Ct или значение Ct ≥ 38 и нет “С”-фигурная кривая усиления, эксперимент действителен. В противном случае, повторите эксперимент; если повторный эксперимент по-прежнему недействителен, обратитесь к техническому персоналу производителя.

4.2 Интерпретация результатов проб:

Значение Ct ≤ 33 и “С”-shaped amplification curve indicate PiCV positive;

Значение Ct между 33 < Кт < 38 считается подозрительным, и рекомендуется пройти повторный тест. Если значение Ct повторного тестирования канала FAM < 33 после исключения аэрозольного загрязнения и наличия четкой кривой усиления, it is considered PiCV positive, в противном случае считается отрицательным;

Нет значения Ct или значение Ct ≥ 38 и нет “С”-shaped amplification curve indicate PiCV negative.

Меры предосторожности：

• Чтобы предотвратить загрязнение, эксперимент должен быть строго разделен, и физическая изоляция между перегородками предпочтительна во избежание перекрестного загрязнения из-за человеческого фактора.. Во время эксперимента надевайте лабораторные халаты и латексные перчатки., использовать инструменты самостоятельно в разных областях, при необходимости меняйте перчатки и лабораторные халаты. После ПЦР, не открывайте крышку сразу; откройте его после достаточного охлаждения, чтобы свести к минимуму аэрозольное загрязнение..
• Полностью разморозьте реагенты перед использованием., но избегайте повторных циклов замораживания-оттаивания. В комплект входят пробирки для ПЦР-реакций емкостью 0,2 мл.; если нужна замена, перенос после полного оттаивания. Строго следуйте инструкциям по приготовлению реагентов и добавлению проб.. Рабочие станции, центрифуги, пипетки, и другие инструменты следует регулярно дезинфицировать хлорсодержащими дезинфицирующими средствами., алкоголь, средства обеззараживания нуклеиновых кислот, или УФ-свет.
• Отрицательный результат не обязательно означает, что хозяин не заражен вирусом.. Плохое качество образца, низкая вирусная нагрузка, или наличие сильных ингибирующих веществ (например, алкоголь, дезинфицирующие средства, антикоагулянты, и т. д.) может привести к неудачному извлечению нуклеиновой кислоты (обнаружение) и “отрицательный” результат. Следуйте критериям интерпретации результатов, и когда есть подозрительные результаты, сначала исключить аэрозольное загрязнение. Если есть другие вопросы, обратитесь к техническому персоналу производителя.
• Этот продукт предназначен только для одноразового использования. Компоненты реагента чувствительны к естественному свету.; избегать воздействия света во время упаковки и хранения. После упаковки, не замораживать-оттаивать повторно. Только для научных исследований; не для клинической диагностики или других целей.