Набор для анализа активности Ca++Mg++-АТФазы Solarbio

Калифорния++мг++-Набор для анализа АТФазной активности

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Спектрофотометр

Кот нет: BC0960

Размер: 50Т/24С

Компоненты:

Реагент I: Жидкость 30 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент II: Жидкость 4 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент III: Порошок×2. Хранение при -20℃. Тщательно растворить с помощью 1 мл дистиллированной воды перед использованием. Оставшийся реагент можно хранить при температуре -20 ℃ в течение одной недели..

Реагент IV: Жидкость 2 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент V: Порошок×1. Хранение при 4℃. Тщательно растворить с помощью 3 мл дистиллированной воды перед использованием. Реагент VI: Порошок×1. Хранение при 4℃. Тщательно растворить с помощью 15 мл дистиллированной воды перед использованием, можно хранить при температуре 4 ℃ в течение одной недели.

Реагент VII: Порошок×1. Хранение при 4℃. Тщательно растворить с помощью 15 мл дистиллированной воды перед использованием, можно хранить при температуре 4 ℃ в течение одной недели.

Реагент VIII: Жидкость 15 мл×1. Хранение в РТ.

Стандартное решение: Жидкость 1 мл×1. 10 мкмоль/мл стандартная фосфорная жидкость, хранение при 4℃.

0.5 мкмоль/мл стандартный рабочий раствор фосфора: Разбавить 10 мкмоль/мл стандарт 20 раз дистиллированной водой 0.5 мкмоль/мл стандарт. Например: добавлять 1.9 мл дистиллированной воды до 0.1 мл стандарта, тщательно перемешать.

Фосфорфиксирующий реагент:

Приготовьте реактивы для определения содержания фосфора.: приготовьте раствор как объемное соотношение H2O: Реагент VI: Реагент VII: Реагент VIII =2:1:1:1, который должен быть светло-желтым. Он показывает потерю эффективности при изменении цвета., загрязнение фосфором, если цвет меняется на синий. Подготовьте реагент перед его использованием..

Примечание: Лучше использовать новые стаканы., стеклянные палочки и стеклянные пипетки или одноразовую пластиковую посуду при приготовлении реагента, чтобы избежать загрязнения фосфором..

Описание продукта:

Са++Mg++-АТФаза широко распространена в растениях., животные, микроорганизмы и клетки, который катализирует гидролиз АТФ с образованием АДФ и неорганического фосфора..

Ca++Mg++-АТФаза расщепляет АТФ с образованием АДФ и неорганического фосфора.. Активность АТФазы можно обнаружить путем измерения количества неорганического фосфора..

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки:

Спектрофотометр, настольная центрифуга, регулируемая пипетка, водяная баня, 1 стеклянная кювета мл, ступка/гомогенизатор, лед и дистиллированная вода.

Процедура:

я. Базовые приготовления:

1. Бактерии или клетки:

Сбор бактерий или клеток в центрифужную пробирку, центрифугирование, и отбросить супернатант. Предложите добавить 1 мл реагента I в 5 миллионов бактерий или клеток. Используйте ультразвук для расщепления бактерий и клеток (помещенный на лед, ультразвуковая мощность 20%, рабочее время 3 секунды, интервал 10 секунды, повторить для 30 раз). Центрифуга в 8000 ×g для 10 минут при 4 ℃ и перед тестированием возьмите надосадочную жидкость на льду..

2. Салфетка:

Добавлять 1 мл реагента I в 0.1 г ткани, полностью шлифовать на льду. Центрифуга в 8000 ×g для 10 минут при 4 ℃ и перед тестированием возьмите надосадочную жидкость на льду..

3. сыворотка: Напрямую

II. Определение:

1. Предварительно разогрейте спектрофотометр для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 660 нм, обнулить счетчик дистиллированной водой.
2. Добавьте следующие реагенты в EP-пробирку:

3. Определение содержания фосфора, добавьте следующие реагенты в 1.5 мл EP-пробирка:

Тщательно перемешать, затем поместите раствор смеси в водяную баню с температурой 40 ℃ для 10 минуты. Охлаждение до комнатной температуры и определение поглощения при 660 нм. Для пустой пробирки и стандартной пробирки достаточно одной или двух пробирок..

III. Расчет:

1. сыворотка:

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующего разложение АТФ с образованием 1 мкмоль неорганического фосфора в час на каждый миллилитр сыворотки.

Са++Mg++-АТФаза (Ед/мл)=Cs×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]×Врв÷с÷Т

=7,5×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]

2. Салфетка, бактерии, или клетки

• Концентрация белка:

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующего разложение АТФ с образованием 1 мкмоль неорганического фосфора в час на каждый миллиграмм тканевого белка.

Са++Mg++-АТФаза (Ед/мг прот)=Cs×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]×Врв÷(Vs×Cpr)÷Т

=7,5×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]÷Cpr

• Вес образца:

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующего разложение АТФ с образованием 1 мкмоль неорганического фосфора в час, каждый миллиграмм ткани.

Са++Mg++-АТФаза (Е/г веса)=Cs×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]×Врв÷(Вс÷В1×Вт)÷Т

=7,5×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]÷Вт

• бактерии или клетки

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующего разложение АТФ с образованием 1 мкмоль неорганического фосфора в час каждые 10000 клетки или бактерии.

Са++Mg++-АТФаза (U/104cell )=Cs×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]×Врв÷(Вс÷В1×500)÷Т

=0,015×[ΔА(Т)-ΔА(С)]÷[ΔА(С)-ΔА(Б)]

Cs: Концентрат стандартной тубы, 0.5 мкмоль/мл;

Веревка: Общий объем реакции, 0.5 мл; Против: Объем образца, 0.2 мл;

КПР: Концентрация белка образца (мг/мл); Т: Время реакции (мин), 1/6 час;

Вт: Вес образца (г);

Вл: Объем реагента I, 1 мл;

500: Количество бактерий или клеток, 5 миллион.

Примечание

1. Этот комплект может обнаружить 24 пробирки с образцами Ca++Mg++-АТФазы в 50 пробирки для каждого образца нужна одна пробирка в качестве контроля.
2. Этот метод имеет характеристики следа, чувствительный и быстрый. Пробирки, используемые для определения, строго бесфосфатные.. Предотвращение загрязнения фосфором является ключом к успеху обнаружения.

Экспериментальный пример:

1. Взять поджелудочную железу и добавить 1 мл реагента I для гомогенизации в ледяной бане. После центрифугирования при 4℃ в течение 10 мин, супернатант помещают на лед и обрабатывают в соответствии с этапами определения. ΔАТ = 0,916-0,389=0,527, ΔАС =0,398-0,004=0,394

Са++Mg++- АТФазная активность (Ед/г массы) "=" 7.5 × ΔAT ÷ ΔAS ÷ W = 100.32 Ед/г массы.

2. Возьмите 0,1 г ивы и добавьте 1 мл реагента Ⅰ для гомогенизации на ледяной бане. После центрифугирования при 4℃ в течение 10 мин, супернатант помещают на лед и обрабатывают в соответствии с этапами определения. ΔAT=0,137-0,124=0,013., и ΔAS=398-0,004=0,394.

Калифорния + + мг + + – АТФазная активность (Ед/г массы) = 7,5×ΔAT ÷ ΔAS ÷ W = 2.47 Ед/г массы.

Рекомендации

[1] Датилес М.Дж., Джонсон Э А, Маккарти Р.Э.. Ингибирование АТФазной активности каталитической части АТФ-синтаз катионными амфифилами.[Дж]. Биохимический и биофизический журнал (Бакалавр делового администрирования)-Биоэнергетика, 2008, 1777(4): 362-368.

сопутствующие товары

BC0060/BC0065 Na+K+ — Набор для анализа АТФазной активности

BC0300/BC0305 Набор для анализа активности АТФ