Solarbio лактатдегидрогеназа (ЛДГ) Набор для анализа активности

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) Набор для анализа активности

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Спектрофотометр/считыватель микропланшетов

Кот нет: BC0685

Размер:100Т/48С

Компоненты:

Экстракт раствора: 60 мл×1. Хранение при 4℃；

Реагент I: 7 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент II: powder×1. Хранение при -20℃. Рабочее решение: dissolve with 1.3 мл дистиллированной воды перед использованием. It can be divided into tubule after matching, which can be preserved for two weeks at -20℃. Avoid repeated freeze and thaw cycles.

Реагент III: 7 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент IV: 25 мл×1. Хранение при 4℃.

Sodium pyruvate standard solution: 1 мл (2 мкмоль/мл) ×1. Хранение при 4℃.

Описание продукта:

Lactate dehydrogenase (LDH or LD) is the terminal enzyme of the glycolysis pathway which is found in nearly all living cells (животные, растения, and prokaryotes). LDH catalyzes the conversion of lactate to pyruvic acid and back, as it converts NAD+ to NADH and back.

NAD+ and lactic acid are oxidized to pyruvic acid by the catalysis of LDH. Pyruvate further reacted with 2,4-dinitrophenylhydrazide to form pyruvate dinitrobenzone, which show brown red color in alkaline solution and the color depth is proportional to the concentration of pyruvate.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки:

Spectrophotometer/Microplate reader, thermostat water bath, настольная центрифуга, регулируемая пипетка, микро-стеклянная кювета/96-луночный планшет с плоским дном, ступка/гомогенизатор, лед, дистиллированная вода.

Процедура:

я. Образец подготовка:

1. Bacteria, клетки, or tissue sample:

Бактерии или клетки:

Collecting bacteria or cells into the centrifuge tube. The liquid in the upper layer is discarded after centrifugation. The ratio of bacteria/cell amount (104): Extract solution volume (мл) is 500~1000:1(it is suggested to take about 5 million bacteria/cell and add 1 mL of Extract solution). Bacteria and cell is split by ultrasonic (помещенный на лед, 200Вт, work time 3s, interval 10s, повторить для 30 раз). Центрифуга в 8000 rpm 4℃ for 10 минуты, take the supernatant and put it on ice for test.

Салфетка:

Ice-bath homogeneity is conducted according to the ratio of tissue mass (г): Extract solution volume (мл) "=" 1: 5~10 (it is recommended to take about 0.1 g of tissue and add 1 mL of Extract solution). Ice bath homogenization. Центрифуга в 8000 rpm and 4℃ for 10 минуты, take the supernatant and put it on ice for test.

2. сыворотка (плазма)образец:

Detect sample directly.

II. Процедура:

1. Preheat the Spectrophotometer/Microplate reader 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 450 нм, установить ноль с помощью дистиллированной воды.
2. Sodium pyruvate standard solution: брать 100 μL of standard solution, dilute to 1, 5, 0.25, 0.125, 0 мкмоль/мл, and use 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0 μmol/mL as standard curve.

3. Sample Test

Mixed thoroughly, place at room temperature for 3 минуты. Брать 200 μL of reaction solution in micro glass cuvette/96 well flat-bottom plate, measured the absorbance at 450 нм, ΔA=AT-AC. Each test tube should set a control tube.

III. ЛДГ Расчеты.

1. Sample Sodium pyruvate content
2. Set the standard curve, y-axis as the standard concentration, мкмоль/мл, x-axis as the 450 nm absorption. Put ΔA(Икс) into standard curve, calculate y(мкмоль/мл)
3. сыворотка (плазма) sample LDH activity

Определение единицы измерения: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute, every milliliter of serum.

ЛДГ(Ед/мл)=y÷T×103=66.7×y

4. Салфетка, bacteria or cultured cells LDH activity

А. Концентрация белка:

Определение единицы измерения: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute, каждый миллиграмм белка.

ЛДГ(Ед/мг прот)= y÷T÷Cpr×103 =66.7×y÷Cpr

Б. Вес образца

Определение единицы измерения: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute, in every gram of tissue. ЛДГ(Ед/г)= y÷T÷W×103 =666.7×y

С. Количество ячеек

Определение единицы измерения: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute every 10000 клетки.

ЛДГ(U/104 cell)= y÷T÷500×103 =0.133×y

Против: Supernate volume (мл), 0.01 мл; Всв: Extract solution volume, 1 мл; Т: Время реакции, 15 минуты;

КПР: Концентрация белка образца, мг/мл; Вт: Вес образца, 0.1 г;

500: Total number of bacteria or cells, 5 миллион; 103: 1 μmol/mL=103 nmol/mL.

Рекомендации

[1] Huang P H, Fu L C, Huang C S, и другие. The uptake of oligogalacturonide and its effect on growth inhibition, lactate dehydrogenase activity and galactin-3 release of human cancer cells[Дж]. Food chemistry, 2012, 132(4): 1987-1995.

сопутствующие товары

BC0740/BC0745 Hexokinase(HK) Набор для анализа активности

BC0540/BC0545 Pyruvate Kinase(PK) Набор для анализа активности

BC2250/BC2255 Phosphoglycerate Kinase(PGK) Набор для анализа активности

BC2270/BC2275 Fructose-bisphosphate aldolase(FBA) Набор для анализа активности