Набор для экстракции ДНК образцов спермы SENO

1. Компоненты набора реагентов

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

4. Знакомство с набором реагентов

Образец спермы экстракция геномной ДНК Набор обеспечивает быстрое и эффективное решение для очистки ДНК образцов спермы.. Он достигает образца очистка ДНК эффективно благодаря специальной буферной системе для экстракции в сочетании со специальными колонками для очистки нуклеиновых кислот..

Этот набор может извлечь ДНК образца спермы в течение 30 минуты, и весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа.. Выделенная ДНК может быть непосредственно использована для ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие приложения.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

А.Реагентный буфер SP:Этот буфер следует хранить в течение длительного времени при температуре от 2 ℃ до 8 ℃.

Б.Реагентный буфер C может выпадать в осадок в условиях низких температур. Рекомендуется нагревать при температуре 65℃ для 5 минуты. После растворения осадка, его можно использовать нормально.

С.Промывной буфер 1: Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола, указанное на этикетке флакона с реагентом.. Отметьте галочкой на этикетке, что указано добавление безводного этанола..

Д. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение содержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, рекомендуется использовать стерильную деионизированную воду вместо элюирующего буфера..

1. Образец обработки:

Пипетка 200мкл из замороженной спермы, инкубировать при 75℃ в течение 10 минут, пока образец спермы не станет вязким. Центрифуга в 12000 об/мин для 5 минуты, аспирируйте как можно больше супернатанта, и сперматозоиды осядут на дне пробирки.

2. Добавьте к осадку из предыдущего шага: 400мкл буфера для реагентов SP, 20мкл протеиназы К (10 мг/мл), 20мкл РНКазы А (10 мг/мл).Дайджест при 65 ℃ для 10 минуты, перевернуть и перемешать 6-7 раз во время пищеварения, пока образец не будет полностью переварен.
3. Добавьте равный объем Реагентный буфер C и равный объем безводного этанола, и хорошо перемешать пипеткой.

(Например: Если вы добавите 400 мкл буфера для реагентов IV, вам нужно будет добавить примерно 460 мкл буфера для реагентов C и 460 мкл безводного этанола.. После добавления реагентного буфера C может образоваться небольшое количество осадков., но это не влияет на последующие эксперименты.)

4. Перенесите полученную жидкость в колонку для экстракционной очистки ДНК. (кассета) (примерно 650-700 мкл каждый раз). Дайте ему постоять при комнатной температуре 2 минуты, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранную отработанную жидкость, и повторно вставьте пробирку для сбора в колонку очистки для следующего шага..
5. Повторить шаг 4, добавление оставшейся жидкости в колонку для экстракционной очистки ДНК (кассета), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросьте отработанную жидкость и трубку для сбора.
6. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (кассета) в коллекторную трубку, добавлять 300 мкл промывочного буфера 1, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отработанную жидкость, и поместите колонку для экстракционной очистки ДНК (кассета) обратно в трубку для следующего шага.

(Примечание: Убедитесь, что в промывочный буфер добавлен безводный этанол. 1.)

7. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1 в колонку очистки экстракции ДНК (кассета), центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты, увеличьте время центрифугирования соответствующим образом, чтобы высушить мембрану более тщательно.
8. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (кассета) в новую центрифужную пробирку, открыть крышку, инкубировать при 65℃для 2 минуты. При необходимости продлите этот шаг, чтобы максимально выпарить этанол., предотвращение влияния остатков этанола на последующие эксперименты.
9. Падение-приостановка 50-100мкл элюирующего буфера на мембрану, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Использование 50 мкл элюционного буфера для элюирования ДНК может увеличить концентрацию ДНК, но снижает общий выход ДНК.. 2. Элюированную ДНК можно повторно нанести на колонку для экстракционной очистки ДНК., центрифугировали в 12,000 об/мин для 2 снова минуты, для увеличения выхода ДНК.)