Animal/Cell Genomic DNA Mini Extraction Kit

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) and in dry conditions, with a shelf life of 12 เดือน. The DNA extraction purification columns can be stored for 1 year in a cool and dry environment. Proteinase K and อาร์เนส เอ contain preservatives, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, they should be kept at -20℃.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 This reagent kit is intended for molecular biology research and should not be used for disease diagnosis or treatment.

3.2 Some components in the reagent kit contain irritants. Protective measures such as wearing protective clothing and goggles are recommended.

3.3 During the usage of this reagent kit, a high-speed centrifuge, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, and EP tubes need to be prepared by the user.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

The Animal/Tissue การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ Kit offers a rapid and effective solution for animal tissue and cell culture DNA purification, widely applicable across animal tissues and cell cultures.

This DNA rapid purification kit swiftly extracts total DNA from animals and cells, yielding DNA directly usable for พีซีอาร์, การซับใต้, and similar applications. The purification process does not require toxic agents like phenol-chloroform, making this DNA purification kit highly suitable for various other samples.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

Before Starting the Experiment:

ก. Reagent Buffer IV tends to precipitate under low-temperature conditions. It is recommended to heat at 65℃ for 5 นาที. After the precipitation dissolves, it can be used normally.

บี. ก่อนใช้งาน, add the specified amount of anhydrous ethanol to ล้างกันชน 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

ค. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE with minimal EDTA content. If EDTA might affect subsequent experiments, ขอแนะนำให้เปลี่ยน Elution Buffer ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ปราศจากไอออน.

1. การจัดการตัวอย่าง:

ก. Take cell culture, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 minute to collect cells, and aspirate the supernatant as much as possible. Add 250μl of Reagent Buffer IV and 10μl of RNaseA (10 มก./มล) to the collected cells, thoroughly suspend, and incubate at 65°C for 10 นาที.

บี. Grind tissue not exceeding 25 mg into a fine powder using liquid nitrogen. Add 200μl of Reagent Buffer IV, 20μl of Proteinase K (10 มก./มล), and 10μl of RNaseA (10 มก./มล) to the powder, shake well, and incubate at 65°C for 30 นาที, shaking the mixture four times during this period.

2. เพิ่ม 200μl of Reagent Buffer Cplus to the lysate and mix well. If a white precipitate appears, it can be left undisturbed; it won’t affect subsequent experiments once the precipitate disappears.

3. เพิ่ม 200เอทานอลปราศจากน้ำ ไมโครลิตร and mix thoroughly. Some precipitation might occur, but it won’t affect subsequent experiments.

4. Apply the obtained liquid to the DNA extraction purification column (sleeve) (approximately 650~700μl each time), let it sit at room temperature for 2 นาที, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะที่รวบรวมไว้, and re-insert the collection tube into the purification column for the next step.

5. Place the DNA extraction purification column (sleeve) into a new collection sleeve, เพิ่ม 700ไมโครลิตรของ ล้างกันชน 1, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะ, and place the DNA extraction purification column (sleeve) back into the sleeve for the next step.

(บันทึก: Confirm the addition of anhydrous ethanol to Rinse Buffer 1.)

6. เพิ่ม 500ไมโครลิตรของ ล้างกันชน 1 to the DNA extraction purification column (sleeve), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is drier.

(บันทึก: Ethanol has a significant impact on subsequent experiments; ดังนั้น, membrane dryness is crucial. หลังจากการปั่นแยก, ensure no ethanol remains before elution. Discard the waste and collection tubes afterward. After rinsing with Wash Buffer 1, the membrane on the DNA purification column should have a faint color. Carefully remove the DNA purification column after centrifugation, ensuring it doesn’t touch the collection tube to prevent ethanol contamination.)

7. Place the DNA purification column in a new centrifuge tube, add 100μl of Elution Buffer directly onto the membrane, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, and collect the DNA.

(บันทึก: Eluting DNA with 50μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but decreases total DNA yield.)