RNA รวมของแบคทีเรีย (บวก) ชุดสกัด

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) in a dry environment and can be preserved for 12 เดือน. Lysozyme contains a preservative, allowing for transportation at room temperature; however, for long-term storage, it should be stored at -20℃

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 ชุดนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.

3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดมีสารระคายเคือง; ขอแนะนำให้ใช้ความระมัดระวังที่จำเป็น (เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา).

3.3 การใช้ชุดอุปกรณ์นี้ต้องใช้อุปกรณ์เพิ่มเติม เช่น เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, ไนโตรเจนเหลว, คลอโรฟอร์ม, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และท่ออีพี.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

This RNA purification kit provides a rapid and efficient purification solution for bacterial RNA, suitable for most bacterial tissues. The kit employs DNA removal technology to effectively eliminate genomic DNA, and the resulting RNA samples typically do not require on-column digestion, reducing the risk of RNA degradation.

The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total bacterial RNA (รวมถึงนิวเคลียร์ RNA และไซโตพลาสซึม RNA) ภายใน 1 ชั่วโมง. RNA ที่แยกออกมาสามารถนำมาใช้กับ RT ได้โดยตรง-พีซีอาร์, การซับภาคเหนือ, ฯลฯ. The entire purification process does not involve toxic reagents such as phenol-chloroform, making the RNA purification kit well-suited for various sample types.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

ข้อควรระวังก่อนเริ่มการทดลอง:

ก. ก่อนใช้งาน, เติมเอทานอลสัมบูรณ์ตามจำนวนที่ระบุลงไป ล้างบัฟเฟอร์ 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark with a check to indicate the addition of absolute ethanol.

บี. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE containing a minimal amount of EDTA. If EDTA may impact subsequent experiments, ขอแนะนำให้เปลี่ยน Elution Buffer ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ปราศจากไอออน.

1. การประมวลผลตัวอย่าง:

ก. Gram-positive bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, collect bacterial cells (1.53 มล), ทิ้งส่วนเหนือตะกอน, เพิ่ม 100μl Lysozyme (10มก./มล), thoroughly mix the bacterial cells, และฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15-30 นาที.

บี. Gram-negative bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, collect bacterial cells (1.53 มล), ทิ้งส่วนเหนือตะกอน, เพิ่ม 10μl Lysozyme (10มก./มล), thoroughly mix the bacterial cells, และฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3-5 นาที.

2.เพิ่ม 400μl RNA Extraction Buffer I, vortex to mix thoroughly.

3. Transfer the lysate to a DNA clearance purification column, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, collect the filtrate (RNA มีอยู่ในตัวกรอง).

4. Accurately estimate the volume of the filtrate, เพิ่ม 0.5 times the volume of absolute ethanol, mix thoroughly; if precipitation occurs, มันไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป.

5. Add the obtained liquid to the RNA extraction purification column (approximately 650~700μl each time), ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, discard the collected waste liquid, and reinsert the collection tube into the RNA extraction purification column for the next step.

6. ทำซ้ำขั้นตอน 5, add the remaining liquid to the RNA extraction purification column, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, discard the waste liquid and the collection tube.

7. Place the RNA extraction purification column into a new collection tube, เพิ่ม 600μl Inhibitor Removal Buffer, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, discard the waste liquid, and reinsert the RNA extraction purification column into the tube for the next step.

8. เพิ่ม 700μl Wash Buffer 1 to the RNA extraction purification column, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที (20,000×ก) สำหรับ 2 นาที, extend the centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.

(บันทึก: Confirm that absolute ethanol has been added to Wash Buffer 1. การมีอยู่ของเอทานอลมีผลกระทบร้ายแรงต่อการทดลองครั้งต่อไป, so membrane drying is crucial. หลังจากการปั่นแยก, ensure there is no ethanol present before elution. Discard the waste liquid and the collection tube.

After washing with Wash Buffer 1, the membrane on the RNA extraction purification column should only have a slight color. หลังจากการปั่นแยก, carefully remove the RNA extraction purification column without touching the collection tube to ensure no ethanol interference.)

9. Place the RNA extraction purification column into a new centrifuge tube, หยด 100 μl Elution Buffer onto the membrane, ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที (15°C~25°C), ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที.

(บันทึก: การชะล้าง RNA ด้วย 50 μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)

10. ทำซ้ำขั้นตอนก่อนหน้า.

(บันทึก: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.)