Blood Genomic DNA Extraction Kit

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) and in dry conditions, with a shelf life of 12 เดือน. The DNA extraction purification columns can be stored for 1 year in a cool and dry environment. Proteinase K and อาร์เนส เอ contain preservatives, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, they should be kept at -20℃.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 This reagent kit is intended for molecular biology research and should not be used for disease diagnosis or treatment.

3.2 Some components in the reagent kit contain irritants. Protective measures such as wearing protective clothing and goggles are recommended.

3.3 During the usage of this reagent kit, a high-speed centrifuge, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, and EP tubes need to be prepared by the user.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

The Blood การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ Reagent Kit offers a rapid and effective method for purifying DNA from blood and other bodily fluids. By lysing red blood cells with a red blood cell lysis buffer, DNA can be efficiently collected.

The Blood DNA Rapid Purification Kit can extract total DNA from whole blood (รวมทั้งเลือดด้วย, เซรั่ม, พลาสมา, and other bodily fluids) ภายใน 30 นาที. The entire purification process doesn’t require toxic reagents such as phenol-chloroform. The extracted DNA can be directly used for พีซีอาร์, การซับใต้, และแอพพลิเคชั่นอื่น ๆ.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

Before Starting the Experiment:

ก. Red Blood Cell Lysis Buffer 1x Preparation: Dilute the 10x Red Blood Cell Lysis Buffer to 1x volume using RNase-free water.

บี. Reagent Buffer B and Reagent Buffer C may precipitate at low temperatures. It is recommended to heat at 65℃ for 5 minutes to dissolve the precipitate before use.

ค. Prior to using ล้างบัฟเฟอร์ 1, add the specified amount of anhydrous ethanol as indicated on the reagent bottle label, and mark a check on the label to indicate ethanol addition.

ดี. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE with minimal EDTA. If EDTA might affect subsequent experiments, it is suggested to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.

1. การจัดการตัวอย่าง: (เก็บรวบรวม 0.1-5 ml blood samples)

ก. เพิ่ม 2-3 times the volume of 1x Red Blood Cell Lysis Bufferto the blood or sample (Dilute the Red Blood Cell Lysis Buffer 10x to 1x before use), mix thoroughly, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, carefully remove the supernatant. The precipitate should theoretically be white or pale red. Add Reagent Buffer B to the precipitate (for 0.1-1ml blood samples, เพิ่ม 200ไมโครลิตรReagent Buffer B; for 1-2ml blood samples, เพิ่ม 400ไมโครลิตร Reagent Buffer B).

บี. If handling samples from low-level organisms like poultry or birds with nucleated red blood cells, a smaller sample volume is needed. In such cases, omit the 1x Red Blood Cell Lysis Buffer and directly add 400ไมโครลิตรof Reagent Buffer B and 20ไมโครลิตร of RNaseA (10 มก./มล), mix thoroughly, และฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที.

2. เพิ่ม 10ไมโครลิตรRNaseA (10 มก./มล), 20ไมโครลิตร โปรตีนเค (10 มก./มล), mix thoroughly, digest at 65℃ for 10 นาที. During this period, พลิกกลับและผสม 2-3 times until digestion is complete.

3. เพิ่ม 200ไมโครลิตรof Reagent Buffer C to the lysate, ผสมโดยการปิเปต, เพิ่ม 200ไมโครลิตร of anhydrous ethanol, ผสมโดยการปิเปต.

4. Apply the obtained liquid to the DNA extraction purification column (ชุด) (approximately 650~700μl each time), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะที่รวบรวมไว้, and re-insert the collection tube into the DNA extraction purification column (ชุด) for the next step.

5. เพิ่ม 700ไมโครลิตรof inhibition removal buffer, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะ.

6. Place the DNA extraction purification column (ชุด) in a new collection tube, เพิ่ม 500ไมโครลิตรof Wash Buffer 1, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งขยะ, and re-insert the DNA extraction purification column (ชุด) into the collection tube for the next step.

(บันทึก: Ensure anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. ทำซ้ำขั้นตอน 6.

8. Place the DNA extraction purification column (ชุด) ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่, uncover, incubate at 65℃ in a water bath for 2 นาที. Extend this step appropriately to evaporate ethanol as much as possible to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.

9. Suspend 50-100ไมโครลิตรof Elution Buffer onto the membrane of the column, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, and collect the DNA.

(บันทึก: 1. การชะล้าง DNA ด้วย 50ไมโครลิตร of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduces total DNA yield; 2. The eluted DNA wash can be reapplied to the DNA extraction purification column. เครื่องปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 minute again to increase DNA yielง.