ชุดสกัด RNA ในเลือดทั้งหมด (การกำจัดดีเอ็นเอจีโนม)

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) in a dry environment and can be preserved for 12 เดือน.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 ชุดนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.

3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดมีสารระคายเคือง; ขอแนะนำให้ใช้ความระมัดระวังที่จำเป็น (เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา).

3.3 การใช้ชุดอุปกรณ์นี้ต้องใช้อุปกรณ์เพิ่มเติม เช่น เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, ไนโตรเจนเหลว, คลอโรฟอร์ม, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และท่ออีพี.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

The RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying RNA from blood and other fluid tissues. It is suitable for most biological fluids and tissues. This RNA purification kit can be applied to blood samples exceeding 0.5 มล, and through DNA removal technology, the extracted RNA is virtually free of genomic DNA.

The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total RNA (รวมถึงนิวเคลียร์ RNA และไซโตพลาสซึม RNA) จากเลือดภายใน 2 ชั่วโมง. The purified RNA can be directly used for applications such as RT-พีซีอาร์, การซับภาคเหนือ, ฯลฯ. The entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform, making the RNA purification kit well-suited for various other sample types.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

ข้อควรระวังก่อนเริ่มการทดลอง:

ก. ก่อนใช้งาน, add the specified amount of ethanol to Wash Buffer 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark a check on the label to indicate the addition of ethanol.

B.Elution Buffer is a 0.1x TE solution containing a minimal amount of EDTA. หาก EDTA ส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the Elution Buffer.

1. การประมวลผลตัวอย่าง: Take 200μL of blood into an EP tube, เพิ่ม 80μL of Red Blood Cell Lysis Buffer 10x, and mix thoroughly by pipetting.
2. เพิ่ม 500μL RNA Extraction Buffer 1 บวก, vigorously shake to mix, centrifuge at 12000rpm for 3 นาที.
3. Transfer the supernatant to a การทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ column, centrifuge at 12000rpm for 1 นาที.
4. เพิ่ม 250μL of ethanol to the supernatant, pipette and mix, transfer the liquid to the RNA purification column, centrifuge at 12000rpm for 30 วินาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.
5. เพิ่ม 600μL Inhibitor Removal Buffer ไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, centrifuge at 12000rpm for 30 วินาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.
6. เพิ่ม 600μL Wash Buffer 1 ไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, centrifuge at 12000rpm for 30 วินาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.

(บันทึก: Confirm that ethanol has been added to Wash Buffer 1. Ethanol presence significantly affects subsequent experiments. ดังนั้น, membrane drying is crucial. หลังจากการปั่นแยก, ensure no ethanol remains before elution, แล้วทิ้งขยะและท่อรวบรวม. หลังจากใช้ Wash Buffer 1, the membrane on the RNA purification column should have a slight color. หลังจากการปั่นแยก, ค่อยๆ ถอดคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ออก, ensuring it does not touch the collection tube to prevent ethanol interference.)

7. ทำซ้ำขั้นตอน 6.
8. Centrifuge the empty tube at 12000rpm for 2 นาที (to evaporate residual ethanol).
9. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงหลอดใหม่, drip 100μL Elution Buffer onto the membrane, ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที (15℃~25℃), centrifuge at 12000rpm for 1 นาที.

(บันทึก: Eluting RNA with 50μL Elution Buffer can increase RNA concentration but reduce total RNA yield.)