ดีทีที, หรือไดไทโอไทรทอล, เป็นสารรีดิวซ์ที่ใช้กันทั่วไปในห้องปฏิบัติการชีวเคมีและอณูชีววิทยา. มันเป็นโมเลกุลขนาดเล็กที่มีไทออลสองตัว (ซัลไฮดริล) และใช้เพื่อสลายพันธะไดซัลไฟด์ในโปรตีนและรักษาสภาพแวดล้อมแบบรีดิวซ์ในการตรวจวิเคราะห์ทางชีวเคมีต่างๆ. หมายเลข CAS สำหรับ DTT คือ 3483-12-3.
การใช้ดีทีที:
- การสูญเสียสภาพโปรตีนและการคลี่ออก:
- DTT มักใช้เพื่อลดพันธะไดซัลไฟด์ในโปรตีน, นำไปสู่การเสื่อมสภาพและการเผยโครงสร้างโปรตีน. สิ่งนี้มีประโยชน์อย่างยิ่งเมื่อศึกษาการพับโปรตีนหรือเมื่อเตรียมโปรตีนสำหรับการวิเคราะห์.
- การกระตุ้นเอนไซม์:
- เอนไซม์บางชนิดจำเป็นต้องมีสภาพแวดล้อมแบบรีดิวซ์จึงจะทำงานได้. DTT ใช้เพื่อรักษาสภาวะการลด, รับประกันการทำงานที่เหมาะสมของเอนไซม์เหล่านี้.
- การลดลงของมวลรวมโปรตีน:
- DTT สามารถใช้เพื่อลดการรวมตัวของโปรตีนหรือโปรตีนที่พับผิด, อำนวยความสะดวกในการละลายและการแยกระหว่างการทดลองเช่นเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส.
- ป้องกันการเกิดออกซิเดชันในการเพาะเลี้ยงเซลล์:
- ในการเพาะเลี้ยงเซลล์, บางครั้งมีการเติม DTT ลงในตัวกลางเพื่อป้องกันการเกิดออกซิเดชันของซิสเตอีนที่ตกค้างในโปรตีน และรักษาสภาวะรีดิวซ์ที่จำเป็นสำหรับกระบวนการเซลล์บางอย่าง.
วิธีการใช้ดีทีที:
- การเตรียมสารละลาย DTT:
- ละลาย DTT ในบัฟเฟอร์หรือตัวทำละลายที่เหมาะสมเพื่อสร้างสารละลาย DTT ที่มีความเข้มข้นที่ต้องการ. ความเข้มข้นที่ใช้กันทั่วไปมีตั้งแต่ 1 มม. ถึง 100 มม, ขึ้นอยู่กับการใช้งานเฉพาะ.
- นอกเหนือจากตัวอย่างโปรตีน:
- โดยทั่วไป DTT จะถูกเติมโดยตรงไปยังตัวอย่างโปรตีนหรือของผสมปฏิกิริยาเพื่อให้ได้สภาวะรีดิวซ์ที่ต้องการ. ความเข้มข้นของ DTT ควรได้รับการปรับให้เหมาะสมตามความต้องการในการทดลองเฉพาะ.
- การฟักตัว:
- ปล่อยให้ส่วนผสมของปฏิกิริยาฟักตัวเป็นระยะเวลาเพียงพอเพื่อให้ DTT ลดพันธะไดซัลไฟด์. เวลาในการฟักตัวอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับการตั้งค่าการทดลองและเป้าหมายเฉพาะของการศึกษา.
- การดับ:
- หลังจากปฏิกิริยารีดักชันเสร็จสิ้น, จำเป็นต้องดับ DTT ส่วนเกินเพื่อป้องกันการรบกวนกับแอปพลิเคชันดาวน์สตรีม. ซึ่งสามารถทำได้โดยการเติมรีเอเจนต์ดับหรือโดยวิธีการอื่นๆ ที่เหมาะสม.
- การวิเคราะห์:
- ดำเนินการวิเคราะห์ตัวอย่างของคุณต่อไป, ไม่ว่าจะเกี่ยวข้องกับเจลอิเล็กโตรโฟเรซิสหรือไม่, การตรวจเอนไซม์, หรือเทคนิคทางชีวเคมีอื่นๆ.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์