นกพิราบอะดีโนไวรัส (PiADV) ชุดตรวจกรดนิวคลีอิก

หมายเลขสินค้า：AP2308005 ข้อมูลจำเพาะ：24ที/48ต พื้นที่จัดเก็บ：-20℃

การแนะนำสินค้า：

• นกพิราบอะดีโนไวรัส (PiADV) is a common and highly contagious adenovirus that infects birds such as pigeons and parrots, serving as the causative agent of acute infectious diseases, including squab adenitis.
• This virus is highly transmissible, capable of vertical transmission through egg laying, as well as horizontal transmission through direct or indirect contact.
• Currently, there are no specific antiviral drugs for PiADV, making early, รวดเร็ว, and convenient detection of PiADV crucial for diagnosis, and treatment, ชะลอการแพร่กระจายของโรค, และป้องกันภาวะแทรกซ้อน.
• This detection kit is designed based on the conservative sequences in the PiADV genome, utilizing primers and probes.
• Through system optimization, it enables precise fluorescence quantitative พีซีอาร์ testing of oral cloacal swabs, เลือด, และตัวอย่างเนื้อเยื่ออื่นๆ จากนก.
• This facilitates the rapid and accurate determination of PiADV infection in the host.

เนื้อหาผลิตภัณฑ์：

สภาพการเก็บรักษา：

เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃, อายุการเก็บรักษาเป็นอย่างน้อย 12 เดือน.

การดำเนินการทดลอง：

1. การจัดเตรียมตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)

1.1 ข้อกำหนดตัวอย่าง:

– ไม้กวาดในช่องปากและในช่องปาก: ใช้สำลีปลอดเชื้อ, สอดเข้าไปในลำคอของนกหรือเสื้อคลุม, หมุนสามครั้ง, วางไว้ในหลอดหมุนเหวี่ยง, ตัดส่วนที่สัมผัสออก, ปิดฝาให้แน่น, และติดป้ายกำกับ. ตัวอย่างที่สามารถทดสอบได้ทันทีควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C ภายใน 24 ชั่วโมง, และตัวอย่างที่ไม่สามารถทดสอบได้ทันทีควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C.

– เลือดทั้งหมด: ใช้ EDTA เป็นสารกันเลือดแข็ง, หลีกเลี่ยงสารกันเลือดแข็งเฮปาริน, ใช้เลือดสดทั้งหมด, หรือเก็บที่อุณหภูมิ 2-8°C ไม่เกิน 7 วัน, หรือเก็บที่อุณหภูมิ -20°C ไม่เกิน 3 เดือน, หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ.

– เนื้อเยื่อ: รับประทานกล้ามเนื้อหรือเนื้อเยื่อสดไม่เกิน 100 มก, ใช้น้ำฆ่าเชื้อ200-500μLเพื่อเตรียมเนื้อเยื่อให้เป็นเนื้อเดียวกัน, และดำเนินการเตรียมตัวอย่างต่อไป.

1.2 การจัดเตรียมตัวอย่าง:

Refer to the SanshiBio Bio “ชุดสกัด DNA อย่างรวดเร็วของจีโนมสัตว์ (สำหรับการวิเคราะห์ PCR)” คู่มือ (แคตตาล็อก: DP202), หรือชุด/วิธีการสกัดกรดนิวคลีอิกอื่นๆ ที่ตรงตามข้อกำหนดที่เกี่ยวข้อง, สำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิกจากตัวอย่างที่ผ่านการแปรรูป. วางกรดนิวคลีอิกตัวอย่างที่สกัดแล้วไว้ในตู้เย็นและทำการทดสอบโดยเร็วที่สุด. เก็บที่อุณหภูมิ 4°C ไม่เกิน 7 วันหรือที่อุณหภูมิ -20°C ไม่เกิน 6 เดือน.

2. การเตรียมระบบปฏิกิริยา (พื้นที่ปฏิกิริยา)

2.1 นำส่วนประกอบแต่ละส่วนของชุดออกมา, ละลายอย่างสมบูรณ์ที่อุณหภูมิห้อง, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และปั่นแยกของเหลวภายในผนังท่อและฝาท่อไปที่ด้านล่างของท่อ. เตรียมสารละลายสำหรับปฏิกิริยาตามปริมาณตัวอย่าง (n+2, โดยที่ n คือจำนวนตัวอย่าง, ขอแนะนำให้ตั้งค่า 1 การควบคุมเชิงบวกและ 1 การควบคุมเชิงลบสำหรับการทดสอบแต่ละครั้ง). วิธีการเตรียมเฉพาะ: เอา (n+2) reaction tubes containing PiADV premix solution, add 11.5µL of PiADV reaction solution to each tube, ใช้ปิเปตเพื่อผสมให้ละเอียด, 23µL ต่อหลุม, และเก็บในตู้เย็น.

2.2 จากนั้นเพิ่มตัวควบคุมเชิงลบ 2μL ตามลำดับ, ตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่สกัดได้, and PiADV positive control to the reaction solution. ปิดฝาท่อ, ทำบันทึก, และปริมาตรรวมของแต่ละปฏิกิริยาคือ 25ไมโครลิตร. ผสมให้เข้ากัน, เครื่องหมุนเหวี่ยงสำหรับ 10 วินาที, และทำการทดลองขยายสัญญาณด้วยเครื่องมือ PCR.

3. การขยาย PCR (พื้นที่การขยายและการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์)

การเสียสภาพล่วงหน้าที่ 95°C สำหรับ 2 นาที; การเสียสภาพที่ 95°C สำหรับ 10 วินาที, การหลอมและยืดที่อุณหภูมิ 60°C สำหรับ 35 วินาที, 40 รอบ. เก็บสัญญาณเรืองแสงที่อุณหภูมิ 60°C. เลือกช่องเรืองแสง FAM (ใช้เครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์ เช่น ซีรี่ส์ ABI, ในกรณีที่จำเป็น, ติดต่อผู้ผลิตหรือเพิ่มสีย้อมสำหรับแก้ไข ROX; มิฉะนั้น, ปฏิบัติตามขั้นตอนปกติ).

4. การตีความผลลัพธ์

4.1 เงื่อนไขสำหรับความถูกต้องของการทดสอบ:

การควบคุมเชิงบวก ค่า Ct ของช่อง FAM < 28 และก “ส”-สังเกตเส้นโค้งการขยายรูปทรง; การควบคุมเชิงลบไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 38 และไม่ “ส”-เส้นโค้งการขยายรูปทรง, การทดลองนั้นถูกต้อง. มิฉะนั้น, ทำการทดลองซ้ำ; หากการทดสอบซ้ำยังคงไม่ถูกต้อง, ติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.

4.2 การตีความผลลัพธ์ตัวอย่าง:

ค่ากะรัต ≤ 33 และ “ส”-shaped amplification curve indicate PiADV positive;

ค่ากะรัตระหว่าง 33 < กะรัต < 38 ถือว่าน่าสงสัย, และแนะนำให้ทำการทดสอบซ้ำ. หากช่อง FAM ทดสอบค่า Ct อีกครั้ง < 33 หลังจากไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอยและมีเส้นโค้งการขยายที่ชัดเจน, it is considered PiADV positive, มิฉะนั้นจะถือว่าเป็นเชิงลบ;

ไม่มีค่า Ct หรือค่า Ct ≥ 38 และไม่ “ส”-shaped amplification curve indicate PiADV negative.

ข้อควรระวัง：

• เพื่อป้องกันการปนเปื้อน, การทดลองควรแบ่งพาร์ติชันอย่างเคร่งครัด, และการแยกทางกายภาพระหว่างพาร์ติชันเป็นที่ต้องการเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามเนื่องจากปัจจัยของมนุษย์. สวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือยางในระหว่างการทดลอง, ใช้เครื่องมืออย่างอิสระในด้านต่างๆ, เปลี่ยนถุงมือและเสื้อกาวน์ห้องปฏิบัติการเมื่อจำเป็น. หลังจาก PCR, อย่าเปิดฝาทันที; เปิดหลังจากเย็นเพียงพอแล้วเพื่อลดการปนเปื้อนของละอองลอย.
• ละลายรีเอเจนต์ให้หมดก่อนใช้งาน, แต่หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. หลอดปฏิกิริยา PCR ที่ให้มาในชุดคือ 0.2 มล; หากจำเป็นต้องเปลี่ยน, ถ่ายโอนหลังจากการละลายเสร็จสมบูรณ์. ปฏิบัติตามคำแนะนำในการเตรียมรีเอเจนต์และการเติมตัวอย่างอย่างเคร่งครัด. เวิร์กสเตชัน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปต, และอุปกรณ์อื่นๆ ควรฆ่าเชื้อด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นประจำ, แอลกอฮอล์, สารชำระล้างกรดนิวคลีอิก, หรือแสงยูวี.
• ผลลัพธ์ที่เป็นลบไม่ได้หมายความว่าโฮสต์ไม่ได้ติดไวรัสเสมอไป. ตัวอย่างมีคุณภาพต่ำ, โหลดไวรัสต่ำ, หรือมีสารยับยั้งอย่างแรง (เช่นแอลกอฮอล์, ยาฆ่าเชื้อ, สารกันเลือดแข็ง, ฯลฯ) อาจส่งผลให้สกัดกรดนิวคลีอิกไม่สำเร็จ (การตรวจจับ) และก “เชิงลบ” ผลลัพธ์. ปฏิบัติตามเกณฑ์การตีความผลลัพธ์, และเมื่อมีผลลัพธ์ที่น่าสงสัย, อันดับแรก ไม่รวมการปนเปื้อนของละอองลอย. หากมีคำถามอื่นๆ, ติดต่อเจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคของผู้ผลิต.
• ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพียงครั้งเดียวเท่านั้น. ส่วนประกอบในรีเอเจนต์ไวต่อแสงธรรมชาติ; หลีกเลี่ยงการสัมผัสแสงระหว่างการบรรจุและการเก็บรักษา. หลังจากบรรจุภัณฑ์, อย่าแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ. สำหรับใช้ในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น; ไม่ใช่เพื่อการวินิจฉัยทางคลินิกหรือเพื่อวัตถุประสงค์อื่น.