Polysaccharide and Polyphenol Plant Total RNA (บวก) Small Quantity Extraction Kit

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องได้ (15-25℃) ในสภาพแวดล้อมที่แห้งและมีความเสถียรสำหรับ 12 เดือน.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 ชุดนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.

3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดมีสารระคายเคือง; ขอแนะนำให้ใช้ความระมัดระวังที่จำเป็น (เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา).

3.3 การใช้ชุดอุปกรณ์นี้ต้องใช้อุปกรณ์เพิ่มเติม เช่น เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, ไนโตรเจนเหลว, คลอโรฟอร์ม, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และท่ออีพี.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

This RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying polysaccharide and polyphenol plant total RNA, suitable for most polysaccharide and polyphenol-rich plant tissues. โดยทั่วไปแล้ว, plant tissues rich in polysaccharides and polyphenols contain a high level of secondary phenolic metabolites and polysaccharides, significantly affecting RNA extraction efficiency. This kit can effectively remove polysaccharides and polyphenols, as well as efficiently eliminate DNA contamination from samples. หากการทดลองมีความไวต่อดีเอ็นเอ, it is recommended to use primers spanning introns for downstream experiments.

The RNA Fast Purification Kit can extract total RNA from plant tissues (รวมถึงนิวเคลียร์ RNA และไซโตพลาสซึม RNA) ภายใน 1 ชั่วโมง. RNA ที่แยกออกมาสามารถนำมาใช้กับ RT ได้โดยตรง-พีซีอาร์, การซับภาคเหนือ, ฯลฯ. The entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform, making this RNA purification kit suitable for various other sample types.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

ข้อควรระวังก่อนเริ่มการทดลอง:

ก. Before using ล้างบัฟเฟอร์ 1, add the specified amount of absolute ethanol according to the label on the reagent bottle, และทำเครื่องหมายในช่องบนฉลากเพื่อระบุว่าได้เติมเอธานอลสัมบูรณ์แล้ว.

บี. The Elution Buffer is a 0.1x โซลูชัน TE ที่มี EDTA น้อยที่สุด. หาก EDTA ส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้เปลี่ยน Elution Buffer ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ปราศจากไอออน.

1. การประมวลผลตัวอย่าง:

ก. การรวบรวมและจัดเก็บวัสดุ:

หากวัตถุดิบสดไม่สามารถนำมาใช้ได้ทันที, ใส่ไว้ในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -80°C.

บี. เมื่อใดก็ตามที่เป็นไปได้, collect fresh materials, as they contain fewer polysaccharides and polyphenols.

2. บดประมาณ 100 ตัวอย่างสด มก. หรือไม่เกิน 20 มิลลิกรัมของวัสดุแห้งโดยใช้ไนโตรเจนเหลว.

3. เพิ่ม 600μl RNA Extraction Buffer I, ensuring there are no blocky tissues in the ground sample. Blocky tissues are difficult to lyse and can reduce RNA yield.

4. กระแสน้ำวนสำหรับ 30 วินาที.

5. ปั่นแยกไลซีนเพื่อ 5 นาทีที่ 12,000 รอบต่อนาที.

(บันทึก: Polysaccharide plant materials may produce a lot of sticky substances at this step, which can shear RNA in subsequent steps. ดังนั้น, remove these substances during this step.)

6. Transfer the supernatant obtained in the previous step to a DNA Clear Purification Column, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, และรวบรวมสารกรอง (บันทึก: RNA มีอยู่ในตัวกรอง).
7. เพิ่ม 250ไมโครลิตรของเอทานอลสัมบูรณ์, ผสมโดยการปิเปต. หากมีฝนตกเล็กน้อย, มันไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป. Add the liquid to the RNA purification column, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, and discard the flow-through.
8. เพิ่ม 700μl Inhibitor Removal Buffer ไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, and discard the flow-through.
9. เพิ่ม 700μl Wash Buffer 1 ไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, and discard the flow-through.
10. เพิ่ม 500μl Wash Buffer 1 ไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 3 นาที, and discard the flow-through.
11. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงขนาด 1.5 มล. ใหม่, ผึ่งเมมเบรนให้แห้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 นาที.

(บันทึก: ยืนยันการเติมเอธานอลลงใน Wash Buffer 1. The presence of ethanol significantly affects subsequent experiments. ดังนั้น, membrane drying is crucial. หลังจากการปั่นแยก, ensure the absence of ethanol before elution. ทิ้งของเสียและท่อรวบรวม. หลังจากใช้ Wash Buffer 1, เมมเบรนบนคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ควรมีสีเพียงเล็กน้อยเท่านั้น. นำคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ออกอย่างระมัดระวังหลังการหมุนเหวี่ยง, ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่ได้สัมผัสท่อรวบรวมเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนเอทานอล.)

12. หยด 50-100μl Elution Buffer ลงบนเมมเบรน, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, และรวบรวมสารละลาย RNA.

(บันทึก: Eluting RNA with 50μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)