Sanshibio 2× SYBR สีเขียว qPCR Mix

หมายเลขสินค้า： EH003 ข้อมูลจำเพาะ：1การจัดเก็บมล: เก็บที่อุณหภูมิ -20°C

การแนะนำสินค้า：

• รีเอเจนต์เฉพาะทางสำหรับเรียลไทม์ พีซีอาร์ การใช้ ซีบีอาร์ วิธีการเรืองแสงโดยใช้สีย้อมสีเขียว I.
• ประกอบด้วยเอนไซม์ hot-start ที่ปิดกั้นด้วยแอนติบอดีเพื่อยับยั้งการขยายขนาดที่ไม่จำเพาะซึ่งเกิดจากการลดขนาดไพรเมอร์หรือการอบอ่อนแบบไม่จำเพาะของไพรเมอร์ภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ.
• ช่วยเพิ่มความจำเพาะของปฏิกิริยาการขยายสัญญาณ.
• โดดเด่นด้วยประสิทธิภาพการขยายสัญญาณสูง, ความจำเพาะและความไวในการตรวจจับที่แข็งแกร่ง, เสถียรภาพที่ดี, และใช้งานง่าย.
• สร้างเส้นโค้งมาตรฐานที่แข็งแกร่งภายในช่วงเชิงปริมาณที่กว้าง, ทำให้สามารถวัดปริมาณได้อย่างแม่นยำ.
• ใช้งานได้กับเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงหลากหลายชนิด, รวมถึงจาก Applied Biosystems, เอพเพนดอร์ฟ, ไบโอ-ราด, โรช, และแบรนด์ในประเทศอื่นๆ.

เนื้อหาผลิตภัณฑ์：

บันทึก：

• ROX Reference Dye แก้ไขข้อผิดพลาดของสัญญาณเรืองแสงระหว่างหลุมในเครื่องมือขยาย PCR แบบเรียลไทม์บางประเภท.
• ROX Reference Dye I เหมาะสำหรับ ABI PRISM 7000/7700/7300/7900HT และ Step One Plus Real-Time PCR System.
• ROX Reference Dye II เข้ากันได้กับ 7500 ระบบ PCR แบบเรียลไทม์, 7500 ระบบ PCR แบบเรียลไทม์ที่รวดเร็ว, สตราทาจีน Mx3000P, Mx3005P, และเอ็มเอ็กซ์4000.
• ควรใช้ ROX Reference Dye I และ II ที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1× ในปฏิกิริยา.
• เครื่องดนตรีอย่าง LightCycler, Thermal Cycler Dice ระบบเรียลไทม์ II, และระบบ Smart Cycler ไม่จำเป็นต้องใช้ ROX Reference Dye.

พื้นที่จัดเก็บ:

เก็บที่อุณหภูมิ -20°C, โดยมีอายุการเก็บรักษาขั้นต่ำที่ 12 เดือน.

คำจำกัดความของกิจกรรม:

การใช้ DNA อสุจิของ mahi-mahi ที่เปิดใช้งานเป็นเทมเพลต/ไพรเมอร์, กิจกรรมถูกกำหนดให้เป็น 1 หน่วย (ยู) ของวัสดุที่ไม่ละลายกรดรวมอยู่ด้วย, โดยการรับขึ้น 10 nmol ของนิวคลีโอไทด์ภายใน 30 นาทีที่ 74°C.

ควบคุมคุณภาพ:

ผลิตภัณฑ์นี้ผ่านการทดสอบคุณภาพและปราศจากฤทธิ์ของดีออกซีไรโบนิวคลีเอสเอ็นโดนิวคลีเอส, กิจกรรมของดีออกซีไรโบนิวคลีเอส เอ็กโซนิวคลีเอส, และการปนเปื้อนของไรโบนิวคลีเอส. เนื้อหาที่เหลือของ DNA จีโนมของโฮสต์อยู่ด้านล่าง 10 สำเนา.

การใช้ผลิตภัณฑ์:

qPCR เชิงปริมาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์ (วิธีย้อม) ขยาย DNA หรือ cDNA; qPCR เชิงปริมาณสัมบูรณ์; qPCR เชิงปริมาณเชิงสัมพันธ์.

คำแนะนำสำหรับการใช้งาน:

• ปล่อยให้รีเอเจนต์ที่จำเป็นปรับสมดุลกับอุณหภูมิห้องจนกระทั่งละลายหมด, ค่อยๆผสมให้เข้ากัน (อย่าน้ำวน), ใช้หลังจากการปั่นแยกเป็นเวลาสั้นๆ เพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดฟองมากเกินไปและรอบการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ. หากใช้บ่อยๆ, เก็บที่อุณหภูมิ 4°C. เตรียมส่วนผสมปฏิกิริยา PCR ตามส่วนประกอบที่กดลง (เตรียมส่วนผสมปฏิกิริยาบนกล่องน้ำแข็ง):

บันทึก：ปริมาณของแต่ละส่วนประกอบสามารถปรับได้ตามความต้องการที่แท้จริง. ผู้ใช้ควรพิจารณาการเติม ROX Reference Dye ตามรุ่นเฉพาะที่ใช้.

• โดยทั่วไปแล้ว, สามารถใช้วิธีสองขั้นตอนสำหรับปฏิกิริยาได้. หากการขยายเสียงไม่พอใจวิธีสองขั้นตอน, สามารถใช้วิธีสามขั้นตอนในการตั้งค่าโปรแกรมปฏิกิริยา PCR.

บันทึก： สภาวะของปฏิกิริยาสามารถปรับและปรับให้เหมาะสมได้ตามความต้องการที่แท้จริง. ควรเลือกและปรับใช้โปรแกรมเส้นโค้งการหลอมเหลวโดยพิจารณาจากโปรแกรมของเครื่องมือขยายสัญญาณที่ใช้.

• หลังจากปฏิกิริยาเสร็จสิ้น, วิเคราะห์กราฟการขยายและผลลัพธ์ของเส้นโค้งการหลอมละลาย. โปรดดูคู่มือผู้ใช้เครื่องมือ Real-Time PCR สำหรับวิธีการวิเคราะห์โดยละเอียด.

ข้อควรระวัง:

1. กรุณาเลือกการหลอมที่เหมาะสม (ส่วนขยาย) อุณหภูมิขึ้นอยู่กับการออกแบบไพรเมอร์, โดยไพรเมอร์ Tm โดยทั่วไปจะมีอุณหภูมิประมาณ 60°C. สำหรับไพรเมอร์ที่มีอุณหภูมิการอบอ่อนต่ำกว่า, ขอแนะนำวิธีสามขั้นตอน. ความเข้มข้นสุดท้ายของไพรเมอร์ที่ใช้แล้วสามารถปรับได้ภายในช่วง 0.2-1.0μM. ความเข้มข้นของเทมเพลต DNA สามารถปรับได้ตามความเข้มข้น.
2. สีย้อม SYBR Green I เป็นสีย้อมไม่เฉพาะเจาะจงที่ปล่อยแสงเรืองแสงเมื่อจับกับ DNA ที่มีเกลียวคู่ (ดีเอสดีเอ็นเอ). อย่างไรก็ตาม, มันสลายตัวได้ง่ายภายใต้แสงจ้า. ดังนั้น, เมื่อออกแบบไพรเมอร์, สิ่งสำคัญคือต้องหลีกเลี่ยงการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์ให้มากที่สุด. ระหว่างการใช้งาน, ควรหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสงจ้าเป็นเวลานานเพื่อเพิ่มความแม่นยำของผลลัพธ์, ความไว, และความจำเพาะ.
3. การเพิ่มความเข้มข้นของแมกนีเซียมไอออนสามารถลดผลการยับยั้งของ SYBR Green I ต่อปฏิกิริยา PCR ได้. เมื่อปรับปฏิกิริยา PCR เรืองแสงให้เหมาะสมโดยใช้ผลิตภัณฑ์นี้, ขอแนะนำให้เพิ่มความเข้มข้นของแมกนีเซียมไอออนเล็กน้อย (0.5-3.0mM สูงกว่าปฏิกิริยา PCR มาตรฐาน).
4. ใช้พื้นที่และปิเปตเฉพาะก่อนและหลังการขยายสัญญาณ, ใส่ถุงมือ, และเปลี่ยนบ่อยๆ. หลังจากทำปฏิกิริยา PCR เสร็จแล้ว, อย่าเปิดท่อปฏิกิริยาเพื่อลดการปนเปื้อนในสภาพแวดล้อมการทดสอบด้วยผลิตภัณฑ์ PCR.