โซล่าร์บิโอ ครีเอทีน ไคเนส (ซีเค) ชุดทดสอบกิจกรรม

ครีเอทีน ไคเนส (ซีเค) ชุดทดสอบกิจกรรม

บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.

อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์

หมายเลขแมว: BC1140

ขนาด:50ที/48ส

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: 60 mL ×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รีเอเจนต์ I: powder×1, stored in dark at -20℃. Dissolved in 10 mL of distilled water before use, the unused reagent shall be stored at -20℃ after repacking, repeated freezing and thawing are prohibited.

รีเอเจนต์ II: powder×1, stored at -20℃. Dissolved in 0.5 mL of distilled water before use, the unused reagent shall be stored at -20℃ after repacking, repeated freezing and thawing are prohibited.

รีเอเจนต์ III: powder×2, stored at -20℃. Dissolved in 0.5 mL of distilled water before use, the reagents that cannot be used up shall be stored at -20℃ after repacking, repeated freezing and thawing are prohibited.

รีเอเจนต์ IV: powder×1, stored at -20℃. Dissolved in 0.65 mL of distilled water before use, the unused reagent shall be stored at -20℃ after repacking, repeated freezing and thawing are prohibited.

รีเอเจนต์ V: 15 mL ×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รายละเอียดสินค้า:

Creatine kinase (ซีเค) (อีซี 2.7.3.2) is also known as creatine phosphokinase, which mainly exists in heart, กล้ามเนื้อ, and brain. It can reversibly catalyze the trans-phosphorus reaction between creatine and ATP. It is an important kinase directly related to cell energy transport, muscle contraction and ATP regeneration.

CK catalyzes creatine phosphate and ADP to generate creatine and ATP, hexokinase catalyzes ATP and glucose to generate glucose-6-phosphate, and glucose-6-phosphate dehydrogenase catalyzes glucose-6- phosphate and NADP+ to generate NADPH, resulting in an increase of 340 nm light absorption value, which is used to express CK enzyme activity.

รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้

ตาชั่ง, เครื่องหมุนเหวี่ยงอุณหภูมิต่ำ, อ่างน้ำอุณหภูมิคงที่, สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, 1 mL quartz cuvette and distilled water.

ขั้นตอน

ฉัน. Extraction of crude enzyme solution:

1. 1. ตัวอย่างเนื้อเยื่อ:

The proportion of tissue mass (ก): volume of Extract solution (มล): 1:5~10 (ขอแนะนำให้ชั่งน้ำหนักประมาณ 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อ, เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด) for ice bath homogeneity. เครื่องปั่นแยกที่ 10000 ×กรัม สำหรับ 15 minutes at 4℃, นำส่วนลอยเหนือตะกอนมาวางบนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.

2. Serum sample:

Direct determination.

3. ตัวอย่างเซลล์:

The number of cells (104): the volume of the Extract solution(มล) is 500~1000:1 (1 mL of Extract solution is recommended to be added to 5 ล้านเซลล์), the Extract solution is added, and the cells are broken by ultrasonic wave in ice bath (พลัง: 300ว, ultrasonic: 3ส, ช่วงเวลา: 7ส, เวลาทั้งหมด: 3 นาที). เครื่องปั่นแยกที่, 10000×กรัม สำหรับ 10 minutes at 4℃, the supernatant and place it on ice for testing.

ครั้งที่สอง. Test ขั้นตอน:

1. Preheat the spectrophotometer for more than 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 340 นาโนเมตร, and adjust to zero with distilled water.
2. วิธีแก้ปัญหาการทำงาน: mix Reagent I, รีเอเจนต์ II, รีเอเจนต์ III, Reagent IV and Reagent V in the proportion of 70:4:7:10:90 (volume ratio) ก่อนใช้งาน. Prepare when the solution will be used. Incubate for 20 minutes in the room temperature before use (this step cannot be omitted).
3. Operation table: add the following reagents into 1 mL cuvette

สาม. Calculation of ซีเค:

• Calculated by tissue protein concentration:

Definition of enzyme activity: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyze the production of 1 nmolof NADPH per minute at 37℃ and pH7.0 every milligram of protein.

CK activity (U/มก) = ΔA÷(ε×d)×VRT×109 ÷ (VS× Cpr) ÷ T= 268 ×ΔA÷Cpr

• Calculated by the quality of tissue samples:

Definition of enzyme activity: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyze the production of 1 nmol of NADPH per minute at 37℃ and pH7.0 in every gram of sample.

CK activity (U/g fresh weight) = ΔA÷(ε×d)×VRT×109 ÷ (VS÷VST×W) ÷T= 268×ΔA÷W

• Calculated by serum volume:

Definition of enzyme activity: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyze the production of 1 nmol of NADPH per minute at 37℃ and pH7.0 in every milliliter of serum.

CK activity (ยู/มล) = ΔA÷(ε×d)×VRV×109 ÷ VS÷T= 268×ΔA

• By cell count:

Definition of enzyme activity: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyze the production of 1 nmol of NADPH per minute at 37℃ and pH7.0 every 10000 เซลล์.

CK activity (U/104cell)=ΔA÷(ε×d)×VRV×109÷(VS ÷ VST×N)÷T=268 ×ΔA÷ N

ε: Molar extinction coefficient of NADPH, 6.22×103 L/mol/cm; ง: Light diameter of cuvette, 1 cm;

VRT: Total volume of reaction system, 0.001 มล;

VS: The volume of sample in reaction system, 0.2 มล; VST: The volume of extract solution, 1 มล;

ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: The mass of sample mass, ก;

เอ็น: The number of cells, 104 units; ต: เวลาการเกิดปฏิกิริยา, 3 นาที.

บันทึก:

1. The CK of serum is not stable. The samples are collected and measured as soon as possible. The CK of serum is stable for 24 hours after being stored at 4℃ in dark.
2. The protein content of the sample needs to be determined separately. โปรตีนบีซีเอ content determination kit can be used for determination.
3. หากค่า OD มากกว่า 0.6, the sample can be diluted properly with the extract solution, and calculation formula can be changed according dilution ratio.
4. ΔAB generally does not exceed 01.

Experimental instances：

1. Take 0.1g of mouse brain, add 1mL of extract solution, homogenate and grind. Take the supernatant, then dilute with extract 4 times and detect according to the measured steps. Calculate ΔAT=A2T- A1T=0.638-0.149=0.489, ΔAB=A2B-A1B=0， ΔA=ΔAT-ΔAB=0.489-0=0.489, calculate the enzyme activity according to sample weight:

CK activity（ U/g weight） =268×ΔA÷W×4（ dilution ratio） =268×0.489÷0.1×4（ dilution ratio）

=5242.08U/g weight.

2. Take 200μL serum of duck to detect directly, calculate ΔAT=A2T-A1T=0.445-0.423=0.022, ΔAB=A2B- A1B=0, ΔA=ΔAT-ΔAB=0.022-0=0.022, calculate the enzyme activity according to volume of serum:

CK activity（U/mL）=268×ΔA=268×0.022=5.896 U/mL.

อ้างอิง：

• Defang Li, Ning Lu, JichunHan, et al.Eriodictyol Attenuates Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury through the Activation of JAK2. Frontiers in Immunology. January2018;(IF3.845)
• Xu Y, Meng X, Hou X, และคณะ. A mutant of the ButhusmartensiiKarsch antitumor-analgesic peptide exhibitsreducedinhibition to hNav1. 4 and hNav1. 5 channels while retaining analgesic activity[เจ].Journal of Biological Chemistry, 2017, 292(44):18270-18280

สินค้าที่เกี่ยวข้อง：

BC2030/ BC2035 Isocitrate Lyase (ICL) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC3170/ BC3175 Acetate kinase (ACK) activity Assay Kit

BC3120/ BC3125 Plant Dehydrogenase(PDHA) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC4220/ BC4225 4-Coumaric Acid Coenzyme A Ligase (4CL) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC4220/ BC4225 4-Coumaric Acid Coenzyme A Ligase (4CL) ชุดทดสอบกิจกรรม