โซลาร์ไบโอ กลีเซอราลดีไฮด์-3-ฟอสเฟต ดีไฮโดรจีเนส(GAPDH) ชุดทดสอบกิจกรรม

กลีเซอรอลดีไฮด์-3-ฟอสเฟต ดีไฮโดรจีเนส(GAPDH) ชุดทดสอบกิจกรรม

บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.

เครื่องมือตรวจจับ: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์

หมายเลขแมว: BC2210

ขนาด: 25T/24 ; 50ที/48ส

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: 60 มล.×1. เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃.

รีเอเจนต์ I: ผง×1. เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃.

รีเอเจนต์ II: 50 มล.×1. เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃.

รีเอเจนต์ III: 30 ไมโครลิตร×1. เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃. The liquid is placed in the EP tube in the reagent bottle. According to the dosage and the volume ratio of Reagent III: distilled water of 3:100, ผสมให้เข้ากัน, use and prepare now.

รายละเอียดสินค้า:

GAPDH (อีซี 1.2.1.12) catalyzes the oxidation of glyceraldehyde 3-phosphate to 1,3-diphosphoglyceride. It is the key enzyme of glycolysis pathway. It is closely related to the pathway of gluconeogenesis, the maintenance of blood glucose concentration and the occurrence of diabetes. It plays an important role in the disorders of glucose, lipid and protein metabolism.

3-phosphoglycerate kinase can catalyze the production of 1,3-diphosphoglyceride from triphosphate and ATP. GAPDH reversely catalyzes the formation of glyceraldehyde-3-phosphate, inorganic phosphorus and NAD+ from 1,3-diphosphoglyceride and NADH. The decrease of NADH measured at 340 nm can reflect the activity of GAPDH.

Required material

Desk centrifuge, ultraviolet spectrophotometer, อ่างน้ำอุณหภูมิคงที่, mortar/ homogenizer, 1 mL quartz cuvette, transferpettor, น้ำแข็งและน้ำกลั่น.

ขั้นตอน:

ฉัน. ตัวอย่าง การสกัด:

1. ตัวอย่างเนื้อเยื่อ:

According to the mass of the tissue (ก): the volume of the Extract solution (มล) เป็น 1: 5~10. Suggested 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อด้วย 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด. Fully grind on ice, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 8000 g and 4℃ for 20 นาที. Supernatant is placed on ice for test.

2. แบคทีเรียหรือเซลล์:

According to the number of cells (104): the volume of the Extract solution (มล) เป็น 500 - 1000: 1. Recommend 5 million with 1 สารละลายสารสกัด มล. Use ultrasonication to split bacteria or cells (พลัง 20% or 200W, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, ทำซ้ำเพื่อ 30 ครั้ง). เครื่องปั่นแยกที่, 8000 g and 4℃ for 10 นาที. Supernatant is placed on ice for test.

3. เซรั่ม (พลาสมา): direct measurement.

ครั้งที่สอง. การกำหนด ขั้นตอน:

• Preheat the ultraviolet spectrophotometer 30 นาที, adjust wavelength to340 nm, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
• Preparation of working solution: pour all Reagent II into one bottle of Reagent I. Fully dissolved. Preheat a certain amount of 37℃ (สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม) หรือ 25 ℃ (สายพันธุ์อื่น) สำหรับ 10 min as required. The unused reagents shall be stored at — 20℃ after sub charging. Avoid repeated freezing and thawing.
• เพิ่มรีเอเจนต์ตามรายการต่อไปนี้:

สาม. การคำนวณ:

Calculated by micro quartz cuvette

• Calculated by protein concentration:

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzymes consumes of 1 nmol of NADH in the reaction system per minute, every mg protein.

GAPDH activity (U/มก) =ΔA÷(ε×d)×VRV×109÷(VS×Cpr)÷T=1072×ΔA÷Cpr

• Calculated by sample weight

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzymes consumes of 1 nmol of NADH in the reaction system per minute, every g sample.

GAPDH activity (U/g fresh weight) =ΔA÷(ε×d)×VRV×109÷(VS×W÷VST)÷T= 1072×ΔA÷W

• Calculated by bacteria or cell amount:

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzymes consumes of 1 nmol of NADH in the reaction system per minute, every 104 bacteria or cells.

GAPDH activity (เซลล์ U/104) =ΔA÷(ε×d)×VRV×109÷(VS×500÷VST)÷T = 2.14×ΔA

• Calculated by volume of culture medium:

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzymes consumes of 1 nmol of NADH in the reaction system per minute, every mL liquid.

GAPDH activity (ยู/มล) =ΔA÷(ε×d)×VRV×109÷VS÷T= 1072×ΔA

ε: molar extinction coefficient of NADH: 6.22×103 L/mol/cm; ง: light path of cuvette, 1 cm;

VRV: ปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด, 0.001 ล;

VS: sample volume in reaction system, 0.03 มล; VST: volume of extraction solution added, 1 มล; ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล;

ว, sample mass, ก;

ต: เวลาการเกิดปฏิกิริยา, 5 นาที;

109: conversion factor, 1 mol = 109 นาโนโมล;

500: จำนวนเซลล์, 5 ล้าน.

บันทึก:

1. When A1 is less than 0.8 or ΔA is greater than 0.7, it is recommended to dilute the sample before determination.
2. The blank tube is a test tube for testing the quality of each reagent component. Under normal conditions, the change does not exceed01.

Experimental example:

1. Take 0.1g of rabbit kidney, เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด, homogenize in ice bath, then centrifuge at 8000g, 4℃ for 20 นาที, take the supernatant and put it on ice, then operate with micro quartz cuvette according to the determination steps, measure and calculate: ΔAT=A1T-A2T =0.815-0.158=0.657, ΔAB= A1B – A2B = 0.865-0.864=0.001, ΔA = ΔAT – ΔAB = 656.

GAPDH activity (มวลยู/กรัม) = 1072×ΔA ÷ W = 7032.32 มวลยู/กรัม.

2. Take 0.1g of clover, เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด, homogenize it in ice bath, then centrifuge it in 8000g and 4℃ for 20 นาที, take the supernatant and put it on ice, then operate according to the determination steps, measure and calculate it with micro quartz cuvette, ΔAT = A1T – A2T =1.026-1.017=0.009, ΔAB= A1B – A2B =0.865-0.864=0.001, ΔA = ΔAT – ΔAB=008.

GAPDH activity (มวลยู/กรัม) - 1072 × ΔA ÷ W =85.76 U/g mass.

สินค้าที่เกี่ยวข้อง：

BC0990/BC0995 Plant Chlorophyll Content Assay Kit

BC4330/BC4335 Plant Carotenoid Content Assay Kit