โซลาร์ไบโอ แลคเตต ดีไฮโดรจีเนส (แอลดีเอช) ชุดทดสอบกิจกรรม

แลคเตตดีไฮโดรจีเนส (แอลดีเอช) ชุดทดสอบกิจกรรม

บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.

อุปกรณ์การดำเนินงาน: เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท

หมายเลขแมว: BC0685

ขนาด:100ที/48ส

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: 60 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃；

รีเอเจนต์ I: 7 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รีเอเจนต์ II: powder×1. การจัดเก็บที่ -20 ℃. วิธีแก้ปัญหาการทำงาน: dissolve with 1.3 mL of distilled water before use. It can be divided into tubule after matching, which can be preserved for two weeks at -20℃. Avoid repeated freeze and thaw cycles.

รีเอเจนต์ III: 7 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รีเอเจนต์ IV: 25 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

Sodium pyruvate standard solution: 1 มล (2 ไมโครโมล/มล) ×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รายละเอียดสินค้า:

Lactate dehydrogenase (LDH or LD) is the terminal enzyme of the glycolysis pathway which is found in nearly all living cells (สัตว์, พืช, and prokaryotes). LDH catalyzes the conversion of lactate to pyruvic acid and back, as it converts NAD+ to NADH and back.

NAD+ and lactic acid are oxidized to pyruvic acid by the catalysis of LDH. Pyruvate further reacted with 2,4-dinitrophenylhydrazide to form pyruvate dinitrobenzone, which show brown red color in alkaline solution and the color depth is proportional to the concentration of pyruvate.

รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:

เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท, thermostat water bath, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, ปิเปตแบบปรับได้, คิวเวทท์แก้วไมโคร/แผ่นก้นแบน 96 หลุม, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, น้ำแข็ง, น้ำกลั่น.

ขั้นตอน:

ฉัน. ตัวอย่าง การตระเตรียม:

1. Bacteria, เซลล์, or tissue sample:

แบคทีเรียหรือเซลล์:

Collecting bacteria or cells into the centrifuge tube. The liquid in the upper layer is discarded after centrifugation. The ratio of bacteria/cell amount (104): Extract solution volume (มล) is 500~1000:1(it is suggested to take about 5 million bacteria/cell and add 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด). Bacteria and cell is split by ultrasonic (วางบนน้ำแข็ง, 200ว, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, ทำซ้ำเพื่อ 30 ครั้ง). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 rpm 4℃ for 10 นาที, take the supernatant and put it on ice for test.

เนื้อเยื่อ:

Ice-bath homogeneity is conducted according to the ratio of tissue mass (ก): Extract solution volume (มล) - 1: 5~10 (it is recommended to take about 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อและเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด). Ice bath homogenization. เครื่องปั่นแยกที่ 8000 rpm and 4℃ for 10 นาที, take the supernatant and put it on ice for test.

2. เซรั่ม (พลาสมา)ตัวอย่าง:

Detect sample directly.

ครั้งที่สอง. ขั้นตอน:

1. Preheat the Spectrophotometer/Microplate reader 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 450 นาโนเมตร, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
2. Sodium pyruvate standard solution: เอา 100 ไมโครลิตรของสารละลายมาตรฐาน, dilute to 1, 5, 0.25, 0.125, 0 ไมโครโมล/มล, and use 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0 μmol/mL as standard curve.

3. Sample Test

Mixed thoroughly, place at room temperature for 3 นาที. เอา 200 μL of reaction solution in micro glass cuvette/96 well flat-bottom plate, measured the absorbance at 450 นาโนเมตร, ΔA=AT-AC. Each test tube should set a control tube.

สาม. แอลดีเอช การคำนวณ.

1. Sample Sodium pyruvate content
2. Set the standard curve, y-axis as the standard concentration, ไมโครโมล/มล, x-axis as the 450 nm absorption. Put ΔA(x) into standard curve, calculate y(ไมโครโมล/มล)
3. เซรั่ม (พลาสมา) sample LDH activity

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute, every milliliter of serum.

แอลดีเอช(ยู/มล)=y÷T×103=66.7×y

4. เนื้อเยื่อ, bacteria or cultured cells LDH activity

ก. ความเข้มข้นของโปรตีน:

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute, every milligram of protein.

แอลดีเอช(U/มก)= y÷T÷Cpr×103 =66.7×y÷Cpr

บี. น้ำหนักตัวอย่าง

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute, in every gram of tissue. แอลดีเอช(U/g)= y÷T÷W×103 =666.7×y

ค. จำนวนเซลล์

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the producing of 1 nmol of pyruvic acid per minute every 10000 เซลล์.

แอลดีเอช(U/104 cell)= y÷T÷500×103 =0.133×y

เทียบกับ: Supernate volume (มล), 0.01 มล; เทียบกับ: Extract solution volume, 1 มล; ต: Reaction time, 15 นาที;

ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, 0.1 ก;

500: Total number of bacteria or cells, 5 ล้าน; 103: 1 μmol/mL=103 nmol/mL.

อ้างอิง

[1] Huang P H, Fu L C, Huang C S, และคณะ. The uptake of oligogalacturonide and its effect on growth inhibition, lactate dehydrogenase activity and galactin-3 release of human cancer cells[เจ]. Food chemistry, 2012, 132(4): 1987-1995.

สินค้าที่เกี่ยวข้อง

BC0740/BC0745 Hexokinase(HK) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC0540/BC0545 Pyruvate Kinase(PK) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC2250/BC2255 Phosphoglycerate Kinase(PGK) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC2270/BC2275 Fructose-bisphosphate aldolase(FBA) ชุดทดสอบกิจกรรม