| คุณลักษณะ | รายละเอียด |
|---|---|
| Cat Number | SN0020 |
| ขนาด | 50T/100T |
| พื้นที่จัดเก็บ | Stored at 4 °C for short storage. For longer storage, the kit can be stored at -20 °C or -80 องศาเซลเซียส. |
ส่วนประกอบชุดอุปกรณ์
| ส่วนประกอบ | 50ต | 100ต |
| Lysis Buffer | 100มล | 200มล |
| Reagent A | 2.5มล | 5มล |
| Medium Buffer | 25มล | 50มล |
| Store Buffer | 5มล | 10มล |
รายละเอียดสินค้า
- Isolates pure nuclei from animal cells and tissues (soft: liver/brain, hard: กล้ามเนื้อ, cultured)
- การใช้งาน: cell death (apoptosis), signaling, metabolism & protein studies
- Nuclei free from protein & nuclease contamination
มาตรการ
การจัดเตรียมตัวอย่าง:
- Tissues:
- Take 100-200mg fresh tissue (liver, brain, heart)
- Wash with PBS/saline, dry, cut into small pieces
- Homogenize with 1ml pre-cooled Ly10is buffer & 50µL Reagent A (ice bath, 20x)
- Cultured Cells:
- Digest and wash cells
- เครื่องหมุนเหวี่ยง (5-10นาที, 800ก), ทิ้งส่วนเหนือตะกอน, collect & count cells
- Resuspend 5×10^7 cells in 1ml pre-cooled Lysis Buffer
- Add 50µL Reagent A, homogenize (ice bath, 20-30x)
Nuclear Isolation:
- Transfer homogenate to a 1.5ml centrifuge tube.
- เครื่องหมุนเหวี่ยง (5นาที, 700ก, 4องศาเซลเซียส), ทิ้งส่วนเหนือตะกอน (nuclear pellet remains).
- Resuspend nuclear pellet with 0.5ml pre-cooled Lysis Buffer.
- Transfer to a new tube containing 0.5ml Medium Buffer (layered carefully).
- เครื่องหมุนเหวี่ยง (5นาที, 700ก, 4องศาเซลเซียส), ทิ้งส่วนเหนือตะกอน (nuclear pellet remains).
- Resuspend nuclear pellet with 5ml Medium Buffer.
- เครื่องหมุนเหวี่ยง (10นาที, 1000ก, 4องศาเซลเซียส), ทิ้งส่วนเหนือตะกอน (purified nuclei pellet).
พื้นที่จัดเก็บ:
- Resuspend purified nuclei in 50-100μl Store Buffer or desired buffer.
- Nuclei are ready for use or can be stored at -70°C
หมายเหตุ:
Ensuring Complete Nuclei:
- Low Temperature: Perform the entire procedure at a low temperature.
- ความเร็ว: Work quickly throughout the process.
- Cell Disruption: The key is to break cells without damaging organelles.
- Tissues: Use a small-capacity glass homogenizer with a tight-fitting pestle for efficient homogenization.
- Cultured Cells: Breaking adherent cells is more challenging. Utilize the small homogenizer and tight pestle for optimal results.
Centrifugation:
- Calculate the correct centrifugal speed (RPM) based on the desired relative centrifugal force (RCF or g-force) using the formula:
- G = 1.11 x 10^-5 x R x (RPM)^2
- G: RCF (ก)
- RPM: Rotations per Minute (squared)
- R: Rotor Radius (cm)
Downstream Applications:
- For Western Blot and 2D-PAGE, directly lyse the nuclear sample by adding loading buffer.
สินค้าที่เกี่ยวข้อง
P1020 1×PBS, PH7.2-7.4, 0.01ม
P1015 เอกสารความปลอดภัย-PAGE loading buffer,4×(with DTT)
SM0020 Mitochondrial Extraction Kit
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์