เตตราเมทิลโรดามีน เอทิลเอสเตอร์ (ทีเอ็มอาร์อี) เป็นสีย้อมเรืองแสงที่ใช้สำหรับการแสดงภาพและการหาปริมาณศักยภาพของเยื่อหุ้มเซลล์ในไมโตคอนเดรียในเซลล์ที่มีชีวิต. เป็นของกลุ่มสีย้อมโรดามีน และมักใช้ในการตรวจวิเคราะห์ระดับเซลล์ต่างๆ เพื่อศึกษาสุขภาพและการทำงานของไมโตคอนเดรีย. TMRE สะสมอยู่ในสถานะใช้งาน, ไมโตคอนเดรียแบบโพลาไรซ์, เปล่งแสงเรืองแสงสีแดง, ซึ่งทำให้เป็นเครื่องมืออันทรงคุณค่าในการประเมินการเปลี่ยนแปลงที่อาจเกิดขึ้นของเยื่อหุ้มเซลล์ไมโตคอนเดรีย.
คุณสมบัติที่สำคัญของ TMRE:
- ตัวบ่งชี้ศักยภาพของเมมเบรน:
- TMRE มีความไวต่อการเปลี่ยนแปลงศักยภาพของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรีย. มันสะสมอยู่ในแอคทีฟ, ไมโตคอนเดรียแบบโพลาไรซ์, เปล่งแสงเรืองแสงสีแดง.
- การซึมผ่านของเซลล์:
- TMRE เป็นเซลล์ที่ซึมผ่านได้และสามารถนำมาใช้ในการทดลองการถ่ายภาพเซลล์ที่มีชีวิต.
วิธีใช้ TMRE:
- การเตรียมสารละลายหุ้น TMRE:
- เตรียมสารละลายสต๊อกของ TMRE โดยการละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสม (โดยทั่วไป DMSO) เพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่ต้องการ. ความเข้มข้นในการทำงานโดยทั่วไปอาจมีตั้งแต่ 10 ถึง 200 นาโนเอ็ม.
- การเตรียมเซลล์:
- เซลล์เพาะเลี้ยงที่สนใจในอาหารเลี้ยงเชื้อและสภาวะการเจริญเติบโตที่เหมาะสม. ตรวจสอบให้แน่ใจว่าเซลล์เกาะติดกันหรือสามารถระงับการถ่ายภาพได้ง่าย.
- กำลังโหลด TMRE:
- เติมสารละลายสต็อค TMRE ลงในอาหารเลี้ยงเซลล์หรือบัฟเฟอร์ที่ความเข้มข้นที่ต้องการ. ฟักเซลล์ด้วย TMRE ตามระยะเวลาที่กำหนด, โดยทั่วไป 15-30 นาที, ทำให้สีย้อมสะสมอยู่ในไมโตคอนเดรีย.
- ซักผ้า (หากมีความจำเป็น):
- หลังจากระยะฟักตัว, ล้างเซลล์ด้วยบัฟเฟอร์เพื่อกำจัด TMRE ส่วนเกินออกจากอาหารเลี้ยงเชื้อ.
- กล้องจุลทรรศน์และการถ่ายภาพ:
- ทำการถ่ายภาพเซลล์ที่มีชีวิตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ที่ติดตั้งชุดตัวกรองที่เหมาะสมสำหรับการเรืองแสงสีแดง. ตื่นเต้น TMRE ที่รอบ ๆ 550-580 nm และตรวจจับแสงเรืองแสงที่ปล่อยออกมาที่ประมาณ 590-620 นาโนเมตร.
- การประเมินสุขภาพไมโตคอนเดรีย:
- วิเคราะห์ความเข้มของแสงเรืองแสงของ TMRE ในไมโตคอนเดรีย. การเรืองแสงที่สูงขึ้นบ่งชี้ถึงไมโตคอนเดรียที่แอคทีฟและเป็นโพลาไรซ์, ในขณะที่การลดลงอาจบ่งบอกถึงการสลับขั้วของเยื่อหุ้มไมโตคอนเดรีย.
- การควบคุมและการสอบเทียบ:
- รวมการควบคุมที่เหมาะสม, เช่น เซลล์ที่ได้รับการบำบัดด้วยตัวแยกไมโตคอนเดรียหรือสารดีโพลาไรซ์, เพื่อปรับเทียบการตอบสนองและตรวจสอบผลลัพธ์.
- ปริมาณ:
- ใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพเพื่อวัดปริมาณความเข้มของแสงฟลูออเรสเซนต์ TMRE. ซึ่งสามารถทำได้ในระดับเซลล์เดียวหรือทั่วทั้งขอบเขตการมองเห็น.
- การตีความข้อมูล:
- ตีความผลลัพธ์ในบริบทของเป้าหมายการทดสอบของคุณ. การเปลี่ยนแปลงของการเรืองแสงของ TMRE สามารถให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับการทำงานของไมโตคอนเดรีย, สุขภาพ, และการตอบสนองต่อสิ่งเร้าต่างๆ.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์