ไตรกลีเซอไรด์(ทีจี) ชุดทดสอบเนื้อหา
บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.
อุปกรณ์การดำเนินงาน: Microplate reader/Spectrophotometer
หมายเลขแค็ตตาล็อก: BC0625
ขนาด:100ที/96ส
ส่วนประกอบ:
รีเอเจนต์ I: รีเอเจนต์ที่จัดหาเอง, เพิ่ม 80 mL of n-heptane and 80 mL of isopropyl alcohol to an empty glass bottle. Seal and mix well, storage at 4℃.
รีเอเจนต์ II: 3 mL×1 bottle. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ III: 10 mL×1 bottle. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ IV: 3 mL×1 bottle. การเก็บรักษาที่ 4 ℃, protected from light. รีเอเจนต์ V: 10 mL×1 bottle. การเก็บรักษาที่ 4 ℃, protected from light. Reagent VI: 10 mL×1 bottle. การเก็บรักษาที่ 4 ℃, protected from light.
มาตรฐาน: powder ×1 bottle, เพิ่ม 5 mL of Reagent I before use. 1 mg/mL triglyceride standard solution, storage at 4℃.
รายละเอียดสินค้า:
ไตรกลีเซอไรด์(ทีจี) is a fat molecule formed by long-chain fatty acids and glycerol, which is not only the main component of cell membrane, but also an important respiratory substrate. The TG is extracted with isopropyl alcohol, then hydrolysis to glycerol and fatty acids after saponification of TG by KOH. Glycerol is oxidized by periodic acid to form formaldehyde. Condensation of formaldehyde and acetylacetone to form yellow components in presence of chloride ions. The yellow component has a characteristic absorption at 420 nm and proportional to the TG content.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:
เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท, คิวเวทท์แก้วไมโคร/แผ่นก้นแบน 96 หลุม, n-heptane, isopropyl alcohol, อ่างอาบน้ำ, ปิเปตแบบปรับได้, distilled water and 125 mL of empty bottle.
ขั้นตอน:
ฉัน. การจัดเตรียมตัวอย่าง:
- เนื้อเยื่อ:
Ice-bath homogeneity is conducted according to the ratio of tissue mass (ก): Reagent Ⅰ volume (มล) - 1: 5~10 (it is suggested to take about 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อและเพิ่ม 1 mL of Reagent I). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 g for 10 minutes at 4℃, supernatant is used for test.
- Bacteria:
เก็บรวบรวม 5 million cells or bacteria into the centrifuge tube, then discard the supernatant, final add 1 mL of Reagent I. Splitting bacteria or cell with ultrasonic for 1 นาที (พลัง 20%, work time 2s, interval 1s). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 g for 10 minutes at 4℃, supernatant is used for test.
- เซรั่ม: ตรวจจับ
ครั้งที่สอง. ขั้นตอน:
- Preheat Spectrophotometer for 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 420 นาโนเมตร, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
- Preheat water bath to 65℃.
| Reagent name (ไมโครลิตร) | หลอดเปล่า (เอบี) | หลอดมาตรฐาน( เช่น) | หลอดทดลอง(ที่) |
| น้ำกลั่น | 40 | – | – |
| Standard solution | – | 40 | – |
| TG test solution | – | – | 40 |
| รีเอเจนต์ Ⅰ | 125 | 125 | 125 |
| รีเอเจนต์ Ⅱ | 25 | 25 | 25 |
| Mix thoroughly after adding Reagent I, add Reagent II, shake strongly for 30 ส, stand several minutes. After layering, 15 μL of the upper layer solution is taken and put it into a new EP tube. | |||
- Detect TG content:
| Reagent name (ไมโครลิตร) | หลอดเปล่า (เอบี) | หลอดมาตรฐาน (เช่น) | หลอดทดลอง (ที่) |
| Upper layer solution | 15 | 15 | 15 |
| รีเอเจนต์ Ⅲ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| รีเอเจนต์ Ⅳ (uL) | 15 | 15 | 15 |
| ผสมให้เข้ากัน, water bath at 65℃ for 3 นาที. | |||
| Reagent Ⅴ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| Reagent Ⅵ (uL) | 50 | 50 | 50 |
| ผสมให้เข้ากัน, water bath at 65℃ for 3 นาที. | |||
หลังจากระบายความร้อนแล้ว, transfer liquid from the EP tube to a micro glass cuvette/96 well flat-bottom plate, and determine the absorbance at 420 นาโนเมตร.
บันทึก: Blank tube and standard tube only need to be measured once.
สาม. การคำนวณ:
1) เซรั่ม:
ทีจี(mg/dL)= C×(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี)×100 =(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี)×100
2) เนื้อเยื่อ:
ความเข้มข้นของโปรตีน:
ทีจี(mg/mg prot)= C×V×(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี) ÷(Cpr×V)-(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี) __ซีพีอาร์
น้ำหนักตัวอย่าง:
ทีจี(mg/g) = C×V×(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี) ÷W=(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี) ۞W
3 ) Bacteria or เซลล์:
ทีจี(เซลล์ U/104) = C×(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี) ÷D=(ที่- เอบี)÷(เช่น- เอบี) ÷D 1dL =100 mL;
วี: The volume of reagent1, 1 มล;
ค: Standard concentration, 1 mg/ mL;
ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน (มก./มล); ว: น้ำหนักตัวอย่าง(ก);
ดี: Density of bacteria or cell, 104 cell/mL.
บันทึก:
- There are volatile substances in the kit. Gloves and masks should be worn during the experiment. The reagent bottle cap should be closed in time after
- After the addition of Reagent Ⅱ, it is necessary to repeatedly and violently vibrate, so that the triglyceride in the test solution can be fully extracted, and the oscillation amplitude, time, repeated times and waiting for stratification time should be
- In order to ensure the repeatability of the test, the cooling time after each water bath should be
- If the OD value of the test tube is greater than 1.5, it is recommended to dilute the sample with Reagent I properly before testing, and multiply it by the corresponding dilution multiple during calculation.
อ้างอิง
- Fletcher M J. A colorimetric method for estimating serum triglycerides[เจ]. Clinica Chimica แอคต้า, 1968, 22(3): 393-397.
- Hercules D M, Sheehan T L. Chemiluminescent determination of serum glycerol and triglycerides[เจ]. Analytical chemistry, 1978, 50(1):22-25.
สินค้าที่เกี่ยวข้อง
BC1890/BC1895 Free Cholestenone (FC) ชุดทดสอบเนื้อหา
BC0750/BC0755 Acetaldehyde Dehydrogenase(ALDH) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC0410/BC0415 Acetyl CoA carboxylase(ACC) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC1980/BC1985 Total Cholesterol(TC) ชุดทดสอบเนื้อหา
ข้อกำหนดทางเทคนิค:
The detection limit: 0.0372 มก./มล
Linear range: 0.0625-3 มก./มล
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์