SENO Sperm Sample DNA Extraction Kit

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) and in dry conditions, with a shelf life of 12 เดือน. The DNA extraction purification columns can be stored for 1 year in a cool and dry environment. Proteinase K and อาร์เนส เอ contain preservatives, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, they should be kept at -20℃.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 This reagent kit is intended for molecular biology research and should not be used for disease diagnosis or treatment.

3.2 Some components in the reagent kit contain irritants. Protective measures such as wearing protective clothing and goggles are recommended.

3.3 During the usage of this reagent kit, a high-speed centrifuge, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, and EP tubes need to be prepared by the user.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

The sperm sample genomic DNA extraction kit provides a rapid and efficient purification solution for sperm sample DNA. It achieves sample การทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ effectively through a dedicated extraction buffer system combined with specific nucleic acid purification columns.

This kit can extract sperm sample DNA within 30 นาที, and the entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. The extracted DNA can be directly used for พีซีอาร์, การซับใต้, และแอพพลิเคชั่นอื่น ๆ.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

Before Starting the Experiment:

ก.Reagent Buffer SP:This buffer should be stored long-term in an environment between 2℃ and 8℃

บี.Reagent Buffer C อาจตกตะกอนภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ. It is recommended to heat at 65℃ for 5 นาที. After the precipitate dissolves, it can be used normally.

ค.ล้างบัฟเฟอร์ 1: ก่อนใช้งาน, add the specified amount of anhydrous ethanol as indicated on the reagent bottle label. Mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

ดี. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE containing a minimal amount of EDTA. If EDTA has an impact on subsequent experiments, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the elution buffer.

1. การประมวลผลตัวอย่าง:

ปิเปต 200ไมโครลิตร of frozen sperm, incubate at 75℃ for 10 minutes until the sperm sample is not viscous. เครื่องปั่นแยกที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 นาที, aspirate the supernatant as much as possible, and the sperm cells will sediment at the bottom of the tube.

2. Add to the sediment from the previous step: 400μl Reagent Buffer SP, 20μl Proteinase K (10 มก./มล), 20ไมโครลิตร RNaseA (10 มก./มล).Digest at 65℃ for 10 นาที, พลิกกลับและผสม 6-7 times during digestion until the sample is fully digested.
3. เพิ่มปริมาณที่เท่ากันของ Reagent Buffer C and an equal volume of anhydrous ethanol, and mix well by pipetting.

(ตัวอย่างเช่น: If you add 400μl of Reagent Buffer IV, you will need to add approximately 460μl of Reagent Buffer C and 460μl of anhydrous ethanol. A small amount of precipitation may form after adding Reagent Buffer C, but it does not affect subsequent experiments.)

4. Transfer the obtained liquid to a DNA extraction purification column (cassette) (approximately 650-700μl each time). Let it stand at room temperature for 2 นาที, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, discard the collected waste liquid, and re-insert the collection tube into the purification column for the next step.
5. ทำซ้ำขั้นตอน 4, adding the remaining liquid to the DNA extraction purification column (cassette), ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, discard the waste liquid and the collection tube.
6. Place the DNA extraction purification column (cassette) into the collection tube, เพิ่ม 300 μl ของ Wash Buffer 1, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, discard the waste liquid, and place the DNA extraction purification column (cassette) back into the tube for the next step.

(บันทึก: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. เพิ่ม 500μl ของ Wash Buffer 1 to the DNA extraction purification column (cassette), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที (20,000×ก) สำหรับ 2 นาที, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane more thoroughly.
8. Place the DNA extraction purification column (cassette) ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่, open the lid, incubate at 65℃for 2 นาที. Extend this step if necessary to evaporate ethanol as much as possible, preventing ethanol residue from affecting downstream experiments.
9. Drop-suspend 50-100μl ของบัฟเฟอร์การชะล้าง ลงบนเมมเบรน, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที.

(บันทึก: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but decreases the overall DNA yield. 2. The eluted DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifuged at 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 minutes again, to increase DNA yield.)