แทค ดีเอ็นเอ โพลีเมอเรส
หมายเลขสินค้า：E001A ข้อมูลจำเพาะ：500พื้นที่เก็บข้อมูล U/1000U/5000U: เก็บที่อุณหภูมิ -20°C
การแนะนำสินค้า：
ผลิตภัณฑ์นี้คือ Taq DNA Polymerase, ที่เรียกกันทั่วไปว่าเอนไซม์ Taq, ซึ่งเป็นหนึ่งใน DNA polymerase ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุด. แสดงออกใน Escherichia coli โดยมียีนโคลนของ Thermus Aquaticus DNA Polymerase จากนั้นทำให้บริสุทธิ์หลายขั้นตอน. ที่ พีซีอาร์ ผลิตภัณฑ์ที่ขยายโดยใช้ผลิตภัณฑ์นี้มีฐาน A เพิ่มที่ 3′ จบ, อนุญาตให้โคลนเป็นเวกเตอร์ T.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์：
| ส่วนประกอบ | E001A-01(500U) | E001A-02(1,000U) | E001A-03(5000U) |
| Taq DNA Polymerase (5U/µL) | 100ไมโครลิตร | 200ไมโครลิตร | 1มล |
| ส่วนผสม dNTP (10มิลลิเมตรละ) | 100ไมโครลิตร | 200ไมโครลิตร | 1มล |
| 10× บัฟเฟอร์ PCR (มก2+ บวก)
| 1มล | 2× 1 มล | 10× 1 มล |
พื้นที่จัดเก็บ:
เก็บที่อุณหภูมิ -20°C, โดยมีอายุการเก็บรักษาขั้นต่ำที่ 12 เดือน.
คำจำกัดความของกิจกรรม:
การใช้ DNA อสุจิเบสปากใหญ่ที่เปิดใช้งานเป็นเทมเพลต/ไพรเมอร์, การบริโภคของ 10 nmol ของนิวคลีโอไทด์ทั้งหมดเป็นวัสดุที่ไม่ละลายกรดภายใน 30 นาทีที่ 74°C กำหนดให้เป็น 1 หน่วยของกิจกรรม (ยู).
ควบคุมคุณภาพ:
ผลิตภัณฑ์นี้ผ่านการทดสอบคุณภาพและปราศจากกิจกรรมของเอ็นโดนิวคลีเอส, กิจกรรมเอ็กโซนิวคลีเอส, และการปนเปื้อนของไรโบนิวคลีเอส. DNA จีโนมของโฮสต์ที่เหลืออยู่ด้านล่าง 10 สำเนา.
การใช้ผลิตภัณฑ์:
การขยาย DNA โดยใช้วิธี PCR; การกำหนดลำดับดีเอ็นเอ.
คำแนะนำการใช้งาน:
- ละลายและผสมสารละลายที่จำเป็นทั้งหมดสำหรับปฏิกิริยา PCR แล้ววางลงในอ่างน้ำแข็งหรือในเครื่องทำความเย็น. ขอแนะนำให้แบ่งส่วนผสมปฏิกิริยา PCR เพื่อหลีกเลี่ยงรอบการแช่แข็งและละลายซ้ำ.
- ขอแนะนำให้ติดตั้งระบบปฏิกิริยา PCR บนอ่างน้ำแข็งหรือในเครื่องทำความเย็น, ปฏิบัติตามระบบปฏิกิริยาที่แนะนำเพื่อใช้อ้างอิง.
- DNA เทมเพลตที่มากเกินไปอาจนำไปสู่ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ไม่เฉพาะเจาะจงได้. จำนวนเทมเพลตที่แนะนำสำหรับเทมเพลตประเภทต่างๆ ในปริมาตรปฏิกิริยา 50µL มีดังนี้:
DNA จีโนมจากสัตว์และพืช: 0.1-1มก;
จีโนมดีเอ็นเอจาก Escherichia coli: 10-100ของ;
พลาสมิดดีเอ็นเอ: 0.1-10ของ.
ระบบปฏิกิริยาที่แนะนำ:
| รีเอเจนต์ | 50ปริมาตรของระบบ µL | ความเข้มข้นสุดท้าย |
| แทค ดีเอ็นเอ โพลีเมอเรส | 1ไมโครลิตร | 0.1ยู |
| 10× บัฟเฟอร์ PCR (มก2+ บวก) | 5ไมโครลิตร | 1× |
| ส่วนผสม dNTP (10มิลลิเมตรละ) | 1ไมโครลิตร | 0.2มิลลิเมตรละ |
| ไพรเมอร์ I (10µM) | 1ไมโครลิตร | 0.2µM |
| ครั้งแรกครั้งที่สอง (10µM) | 1ไมโครลิตร | 0.2µM |
| แม่แบบดีเอ็นเอ | 1ไมโครลิตร | - |
| ddH2โอ | ถึง 50µL | - |
บันทึก: ปริมาณของส่วนประกอบแต่ละอย่างในระบบปฏิกิริยาสามารถปรับได้ตามความต้องการที่แท้จริง.
- ปิเปตอย่างทั่วถึงและผสมระบบปฏิกิริยาที่เตรียมไว้โดยใช้ปิเปต, ปิดผนึกท่อ PCR ด้วยฝาปิด, ติดป้ายกำกับอย่างเหมาะสม, และปั่นแยกที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาสั้นๆ.
- วางท่อ PCR ที่เตรียมไว้ลงใน เครื่องพีซีอาร์, กำหนดเงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยา, และเริ่มต้นปฏิกิริยา PCR.
สภาวะของปฏิกิริยา:
| วิธีการ/ขั้นตอน | การตั้งเวลา | รอบ |
| 95℃ (การเสียสภาพก่อนกำหนด) | 2-5นาที | 1 |
| 95℃ (การเสียสภาพ) | 30วินาที | 25-35 รอบ |
| 55℃ -60 ℃ (การหลอม) | 30วินาที | |
| 72℃ (ส่วนขยาย) | 1นาที | |
| 72℃ (ส่วนขยายสุดท้าย) | 10นาที | 1 |
| 4℃ (ถือ) | ∞ | - |
บันทึก: สภาวะของปฏิกิริยาสามารถปรับและปรับให้เหมาะสมตามความต้องการที่แท้จริงได้.
ข้อควรระวัง:
- เวลาในการขยายสามารถปรับได้ขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ เช่น ความยาวและเนื้อหา GC ของผลิตภัณฑ์ PCR. เวลาในการขยายต่อ kb ของผลิตภัณฑ์มีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับความซับซ้อนของเทมเพลต: ต้องใช้เทมเพลตง่ายๆ 20 วินาที, เทมเพลตทั่วไปที่ต้องการ 30 วินาที, และต้องใช้เทมเพลตที่ซับซ้อน 1 นาที.
- การตั้งค่าปฏิกิริยา PCR ควรได้รับการปรับแต่งให้เหมาะกับสภาวะที่แตกต่างกัน เช่น เทมเพลต, ไพรเมอร์, ความยาวของผลิตภัณฑ์ PCR, และเนื้อหา GC. โดยทั่วไปความเข้มข้นสุดท้ายของไพรเมอร์จะอยู่ในช่วง 0.1-1.0μM. ความเข้มข้นของเทมเพลต DNA สามารถปรับเปลี่ยนได้ตามความเหมาะสม. สำหรับเทมเพลตที่ซับซ้อนหรือเนื้อหา GC สูง, ขอแนะนำให้ยืดเวลาก่อนการเสียสภาพ/การเสียสภาพหรือการขยายเวลา และเพิ่มอุณหภูมิการเสียสภาพ/การอบอ่อน.
- ใช้พื้นที่และปิเปตที่กำหนดไว้ก่อนและหลังการขยายสัญญาณ, ใส่ถุงมือ, และเปลี่ยนบ่อยๆ. หลังจากทำปฏิกิริยา PCR เสร็จแล้ว, อย่าเปิดท่อปฏิกิริยาทันที. ปล่อยให้เย็นเพียงพอที่ 4°C หรือ -20°C ก่อนเปิดเพื่อลดความเสี่ยงของการปนเปื้อนของผลิตภัณฑ์ PCR ต่อสภาพแวดล้อมในห้องปฏิบัติการ.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์