禽類性別鑑定核酸檢測試劑盒 (PCR法)

• 編號： AN2206001
• 規格：48時間 100時間

產品介紹：

此試劑盒可擴增羽毛等樣本中的特定核酸片段, 血, 以及各種鳥類的組織 (包括 鸚鵡形目, 鴿形目, 雞形目, 鸛形目, 鶴形目, 和一些雁形目), 使用 聚合酶鍊式反應.

它包括抗抑制 2× Taq PCR Master Mix (帶染料) 以及 PCR 所需的其他成分. 擴增產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳結果測定.

產品內容：

儲存條件：

-20℃保存, 保存期限至少為 12 月

來樣加工:

參考動物基因組DNA快速萃取試劑盒 (用於 PCR 分析) 三石生物使用說明書 (產品編號: DP202) 用於樣品處理. 保存處理後的樣品以供以後使用.

1. 實驗操作：

• 樣品製備 (樣品製備區)
• 核酸萃取:
• 請按照以下說明進行操作 “動物基因組DNA快速萃取試劑盒 (用於 PCR 分析)” 或使用任何其他符合要求的合適核酸萃取試劑盒/方法. 從處理後的樣本中萃取核酸.
• 最好盡快檢測萃取的核酸. 將它們放在冰上, 如果不立即使用，請將其儲存在 4°C 或 -20°C 下.

2. 準備反應系統 (樣品添加區)

2.1 反應混合物的製備:

• 根據樣本數量計算所需試劑體積.
• 具體準備如下: 吸管 (n × 7.5 µL 測試試劑 C + n × 10 µL 測試試劑 D + n × 1 µL 測試試劑 E) 放入乾淨的離心管中. 透過移液器充分混合, 並等分 18 µL 注入每個孔中 0.2 mL PCR 管 (離心管). (如果有很多樣本, 提前準備好混合物並在 2-8°C 下短暫保存; 內使用 2 小時。)

2.2 添加 2 µL 萃取的樣本核酸加入到每個反應混合物中, 蓋上管子, 記錄細節, 並使總體積達到 20 每次反應 µL. 充分混合離心 30 放入之前幾秒鐘 PCR機 用於放大.

PCR擴增 (擴增及產物分析區)

PCR實驗方案:

• 94°C 初始變性 3 分分鐘.
• 32 的週期: 94°C 為 30 秒 (變性), 50°C 為 45 秒 (退火), 72°C 為 50 秒 (擴大).
• 最終延伸溫度為 72°C 8 分分鐘, 然後保持在4°C.
• 將擴增產物在 4°C 下徹底冷卻 (或在-20°C 下快速加熱約 5 分分鐘) 為了 15 分分鐘.

瓊脂糖凝膠電泳(以水平瓊脂糖凝膠電泳為例)

4.1 準備凝膠:

根據注膠量和膠濃度 (1%〜1.5%), 測量適當體積​​的電泳緩衝液 (TAE 或 TBE, 產品編號分別為 DA001 或 DA002, 或符合要求的同等產品), 然後倒入三角燒瓶中.

筆記: 凝膠注模緩衝液和電泳緩衝液必須一致.

4.2 仔細稱重瓊脂糖 (產品編號: DA003, 或同等品牌), 並將其添加到燒瓶中. 用羊皮紙或密封膜蓋住燒瓶，並在微波爐中加熱溶解瓊脂糖. 加熱至沸騰, 戴耐熱手套, 輕輕旋轉燒瓶. 重複直至瓊脂糖完全溶解.

筆記: 瓊脂糖溶解過程應多次短暫煮沸，以防止溶液過熱沸溢. 確保瓊脂糖完全溶解，避免電泳影像不清晰.

4.3 添加核酸染料 (產品編號: DA004, 或同等品牌) 至完全溶解的瓊脂糖.

4.4 將瓊脂糖溶液倒入凝膠澆鑄托盤中，並在適當的位置插入梳子. 凝膠厚度應介於 3 到 5 毫米.

4.5 讓凝膠在室溫下凝固 (關於 30 分鐘到 1 小時). 小心取下梳子並將凝膠放入預先裝有電泳緩衝液的電泳槽中.

電泳和上樣:

4.6 載入 5 µL DNA 標記 (產品編號: DA005, 或同等品牌) 和 10 將冷卻後的擴增產物 µL 注入孔中. 加載所有樣本後, 讓代表 2 打開電源前幾分鐘. 設定電壓 (70-120V) 和運行時間 (20-30 分分鐘) 根據條件.

結果解讀

確定結果:

• 如果單一條帶出現在大約 700 BP, 樣本被確定為男性.
• 如果700bp和400bp左右出現兩條擴增條帶 (或僅在 400bp 左右出現一條擴增帶), 樣本被認定為女性.
• 如果沒有可見條帶, 樣本中未檢測到鳥類性別辨識的特定基因. 建議重新進行核酸萃取和擴增或聯絡廠商技術支援協助.

預防措施：

• 為防止污染, 實驗應嚴格分區, 不同區域之間物理隔離，避免人為因素造成的交叉污染. 實驗過程中穿實驗服和乳膠手套, 並在不同區域使用單獨的工具. 在區域之間移動時應更換手套和實驗室外套.
• 試劑使用前應充分解凍, 但應避免反覆凍融循環. 嚴格按照說明進行試劑製備和樣品添加. 工作台, 離心機, 移液器, 等器具應定期使用含氯消毒劑消毒, 乙醇, 核酸去污劑, 或紫外線燈.
• PCR反應完成後, 不要立即打開蓋子. 等待充分冷卻後再打開，盡量避免氣溶膠污染.
• 該試劑盒僅用於擴增一些非雀形目鳥類的特定基因 (家禽), 對於其他相關產品, 請諮詢三力生物. 本產品僅供科學研究使用，不可用於臨床診斷或其他用途.