鴿腺病毒 (皮ADV) 核酸檢測試劑盒

編號：AP2308005 規格：24噸/48時間 貯存：-20℃

產品介紹：

• 鴿腺病毒 (皮ADV) 是一種常見且具有高度傳染性的腺病毒，可感染鴿子和鸚鵡等鳥類, 作為急性傳染病的病原體, 包括乳鴿腺炎.
• 這種病毒具有很強的傳播性, 能夠透過產卵垂直傳播, 以及透過直接或間接接觸的水平傳播.
• 現在, 目前尚無針對 PiADV 的特效抗病毒藥物, 早做, 迅速的, 方便地檢測對診斷至關重要的 PiADV, and treatment, 減緩疾病的傳播, 並預防併發症.
• 此檢測試劑盒是根據PiADV基因組中的保守序列設計的, 利用引子和探針.
• 透過系統優化, 它可以實現精確的螢光定量 聚合酶鍊式反應 口腔泄殖腔拭子檢測, 血, 以及鳥類的其他組織樣本.
• 這有助於快速且準確地確定宿主中 PiADV 感染情況.

產品內容：

儲存條件：

-20℃保存, 保存期限至少為 12 月.

實驗操作：

1. 樣品製備 (樣品製備區)

1.1 樣品要求:

– 口腔和泄殖腔拭子: 取一根無菌棉籤, 將其插入鳥的喉嚨或泄殖腔, 旋轉三遍, 將其放入離心管中, 剪掉暴露的部分, 旋緊蓋子, 並標記它. 可立即檢測的樣品應保存在2-8°C的範圍內 24 小時, 無法及時檢測的樣品應保存在-20℃.

– 全血: 使用 EDTA 作為抗凝血劑, 避免使用肝素抗凝血劑, 使用新鮮全血, 或在 2-8°C 下保存不超過 7 天, 或在-20°C保存不超過 3 月, 避免反覆凍融循環.

– 組織: 取新鮮肌肉或器官組織不超過100mg, 使用200-500μL無菌水製備組織勻漿, 並進行後續樣品製備.

1.2 樣品製備:

參考SanshiBio Bio “動物基因組DNA快速萃取試劑盒 (用於PCR分析)” 手動的 (目錄: DP202), 或其他符合相關要求的核酸萃取試劑盒/方法, 用於處理樣本的核酸萃取. 將萃取的樣本核酸置於冷卻器中並儘快進行檢測. 4℃保存不超過 7 天或在-20°C 不超過 6 月.

2. 反應體系製備 (反應區)

2.1 取出套件中的每個組件, 室溫下完全解凍, 離心機用於 10 秒, 將管壁和管帽內的液體離心至管底. 依樣品量配製反應液 (n+2, 其中 n 是樣本數, 建議設定 1 陽性對照和 1 每個實驗的陰性對照). 具體製備方法: 拿 (n+2) 含有 PiADV 預混溶液的反應管, 在每個管中加入 11.5μL PiADV 反應溶液, 使用移液管充分混合, 23每孔 µL, 並存放在冷卻器中.

2.2 然後依序加入2μL陰性對照, 萃取樣本核酸, 和PiADV陽性對照反應溶液. 關閉管蓋, 做一個記錄, 每個反應總體積為25μL. 充分混合, 離心機用於 10 秒, 並在PCR儀上進行擴增實驗.

3. PCR擴增 (擴增及產物分析區)

95°C 預變性 2 分分鐘; 95°C 變性 10 秒, 60°C 退火和延伸 35 秒, 40 週期. 在 60°C 收集螢光訊號. 選擇 FAM 螢光通道 (使用ABI系列等即時螢光定量PCR儀器, 如果需要的話, 聯絡製造商或添加 ROX 修正染料; 否則, 遵循正常程序).

4. 結果解讀

4.1 實驗有效性的條件:

陽性對照 FAM 通道 Ct 值 < 28 和一個 “S”-觀察到形狀的擴增曲線; 陰性對照無Ct值或Ct值≥ 38 和不 “S”-成形擴增曲線, 實驗有效. 否則, 重複實驗; 如果重複實驗仍然無效, 聯絡廠商技術人員.

4.2 樣本結果的解釋:

CT值≤ 33 和 “S”-形狀擴增曲線顯示 PiADV 陽性;

Ct 值之間 33 < CT < 38 被認為可疑, 建議重新測試. 如果 FAM 頻道重測 Ct 值為 < 33 排除氣溶膠污染後，有明確的擴增曲線, 被認為是 PiADV 陽性, 否則被視為負面;

無Ct值或Ct值≥ 38 和不 “S”-形狀擴增曲線顯示 PiADV 陰性.

預防措施：

• 為防止污染, 實驗應嚴格分區, 分區之間最好物理隔離，避免人為因素造成的交叉污染. 實驗過程中穿實驗服和乳膠手套, 在不同領域獨立使用工具, 需要時更換手套和實驗室外套. PCR後, 不要立即打開蓋子; 充分冷卻後打開，以最大程度地減少氣溶膠污染.
• 使用前將試劑完全解凍, 但避免反覆凍融循環. 套件中提供的PCR反應管為0.2mL; 如果需要更換, 完全解凍後轉移. 嚴格按照試劑製備及樣品添加說明進行操作. 工作站, 離心機, 移液器, 及其他器具應定期以含氯消毒劑消毒, 酒精, 核酸去污劑, 或紫外線.
• 陰性結果不一定代表宿主沒有感染病毒. 樣品品質差, 病毒量低, 或存在強抑制物質 (例如酒精, 消毒劑, 抗凝血劑, ETC。) 可能會導致核酸萃取不成功 (偵測) 和一個 “消極的” 結果. 遵循結果解釋標準, 當出現可疑結果時, 首先排除氣溶膠污染. 如果還有其他問題, 聯絡廠商技術人員.
• 本產品僅供一次性使用. 試劑中的成分對自然光敏感; 包裝及儲存過程應避免光照. 包裝後, 請勿反覆凍融. 僅供科學研究使用; 不用於臨床診斷或其他目的.