鸚鵡喙羽病 (CPs) 核酸檢測試劑盒

編號：AP2308001 規格：24時間 | 48時間 | 96時間 貯存：-20℃

產品介紹：

鸚鵡喙羽病 (Chlamydia psittaci, CPs)” has a round or oval shape with a diameter of approximately 0.3μm. It proliferates in cell vacuoles, forming loosely packed inclusion bodies. Cps is a naturally occurring pathogen that can be transmitted among mammals. 所以, 早期的, 迅速的, and convenient detection of Cps is crucial for diagnosis, 減緩疾病的傳播, 並預防併發症. This test kit is designed based on the conserved sequences in the Cps gene, 具有最佳化的條件, 實現準確的螢光定量 聚合酶鍊式反應 口語測試, 泄殖腔拭子, 血, 以及鳥類的其他組織樣本. This facilitates the rapid determination of whether the host is infected with Cps.

產品內容：

儲存條件：

-20℃保存, 保存期限至少為 12 月.

實驗操作：

1. 樣品製備 (樣品製備區)

1.1 樣品要求:

– 口腔和泄殖腔拭子: 取一根無菌棉籤, 將其插入鳥的喉嚨或泄殖腔, 旋轉三遍, 將其放入離心管中, 剪掉暴露的部分, 旋緊蓋子, 並標記它. 可立即檢測的樣品應保存在2-8°C的範圍內 24 小時, 無法及時檢測的樣品應保存在-20℃.

– 全血: 使用 EDTA 作為抗凝血劑, 避免使用肝素抗凝血劑, 使用新鮮全血, 或在 2-8°C 下保存不超過 7 天, 或在-20°C保存不超過 3 月, 避免反覆凍融循環.

– 組織: 取新鮮肌肉或器官組織不超過100mg, 使用200-500μL無菌水製備組織勻漿, 並進行後續樣品製備.

1.2 樣品製備:

參考三種生物 “動物基因組DNA快速萃取試劑盒 (用於PCR分析)” 手動的 (目錄: DP202), 或其他符合相關要求的核酸萃取試劑盒/方法, 用於處理樣本的核酸萃取. 將萃取的樣本核酸置於冷卻器中並儘快進行檢測. 4℃保存不超過 7 天或在-20°C 不超過 6 月.

2. 反應體系製備 (反應區)

2.1 取出套件中的每個組件, 室溫下完全解凍, 離心機用於 10 秒, 將管壁和管帽內的液體離心至管底. 依樣品量配製反應液 (n+2, 其中 n 是樣本數, 建議設定 1 陽性對照和 1 每個實驗的陰性對照). 具體製備方法: 拿 (n+2) reaction tubes containing Cps premix solution, add 11.5µL of Cps reaction solution to each tube, 使用移液管充分混合, 23每孔 µL, 並存放在冷卻器中.

2.2 然後依序加入2μL陰性對照, 萃取樣本核酸, and Cps positive control to the reaction solution. 關閉管蓋, 做一個記錄, 每個反應總體積為25μL. 充分混合, 離心機用於 10 秒, 並在PCR儀上進行擴增實驗.

3. PCR擴增 (擴增及產物分析區)

95°C 預變性 2 分分鐘; 95°C 變性 10 秒, 60°C 退火和延伸 35 秒, 40 週期. 在 60°C 收集螢光訊號. 選擇 FAM 螢光通道 (使用ABI系列等即時螢光定量PCR儀器, 如果需要的話, 聯絡製造商或添加 ROX 修正染料; 否則, 遵循正常程序).

4. 結果解讀

4.1 實驗有效性的條件:

陽性對照 FAM 通道 Ct 值 < 28 和一個 “S”-觀察到形狀的擴增曲線; 陰性對照無Ct值或Ct值≥ 38 和不 “S”-成形擴增曲線, 實驗有效. 否則, 重複實驗; 如果重複實驗仍然無效, 聯絡廠商技術人員.

4.2 樣本結果的解釋:

CT值≤ 33 和 “S”-shaped amplification curve indicates Cps positive;

Ct 值之間 33 < CT < 38 被認為可疑, 建議重新測試. 如果 FAM 頻道重測 Ct 值為 < 33 排除氣溶膠污染後，有明確的擴增曲線, it is considered Cps positive, 否則被視為負面;

無Ct值或Ct值≥ 38 和不 “S”-shaped amplification curve indicate Cps negative.

預防措施：

• 為防止污染, 實驗應嚴格分區, 分區之間最好物理隔離，避免人為因素造成的交叉污染. 實驗過程中穿實驗服和乳膠手套, 在不同領域獨立使用工具, and change gloves and lab coats when needed. PCR後, 不要立即打開蓋子; 充分冷卻後打開，以最大程度地減少氣溶膠污染.
• 使用前將試劑完全解凍, 但避免反覆凍融循環. 套件中提供的PCR反應管為0.2mL; 如果需要更換, 完全解凍後轉移. 嚴格按照試劑製備及樣品添加說明進行操作. 工作站, 離心機, 移液器, 及其他器具應定期以含氯消毒劑消毒, 酒精, 核酸去污劑, 或紫外線.
• 陰性結果不一定代表宿主沒有感染病毒. 樣品品質差, 病毒量低, 或存在強抑制物質 (例如酒精, 消毒劑, 抗凝血劑, ETC。) 可能會導致核酸萃取不成功 (偵測) 和一個 “消極的” 結果. 遵循結果解釋標準, 當出現可疑結果時, 首先排除氣溶膠污染. 如果還有其他問題, 聯絡廠商技術人員.
• 本產品僅供一次性使用. 試劑中的成分對自然光敏感; 包裝及儲存過程應避免光照. 包裝後, 請勿反覆凍融. 僅供科學研究使用; 不用於臨床診斷或其他目的.