沙門氏菌核酸檢測試劑盒

編號：AP2308004 規格：24噸/48時間 貯存：-20℃

產品介紹：

沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌，可導致沙門氏菌病, 加蛋, 家禽, 肉類是常見的傳播來源. 此檢測試劑盒以即時螢光定量 聚合酶鍊式反應 選擇性擴增水等樣本中沙門氏菌特定 DNA 片段的技術, 屎, 以及疑似受污染食品. 透過Ct值可以判斷樣本中是否有沙門氏菌, 或可透過標準曲線確定樣本中沙門氏菌的污染程度.

產品內容：

儲存條件：

-20℃保存, 保存期限至少為 12 月.

實驗操作：

1. 樣品製備 (樣品製備區)

1.1 樣品要求:

– 口腔和泄殖腔拭子: 取一根無菌棉籤, 將其插入鳥的喉嚨或泄殖腔, 旋轉三遍, 將其放入離心管中, 剪掉暴露的部分, 旋緊蓋子, 並標記它. 可立即檢測的樣品應保存在2-8°C的範圍內 24 小時, 無法及時檢測的樣品應保存在-20℃.

– 全血: 使用 EDTA 作為抗凝血劑, 避免使用肝素抗凝血劑, 使用新鮮全血, 或在 2-8°C 下保存不超過 7 天, 或在-20°C保存不超過 3 月, 避免反覆凍融循環.

– 組織: 取新鮮肌肉或器官組織不超過100mg, 使用200-500μL無菌水製備組織勻漿, 並進行後續樣品製備.

1.2 樣品製備:

根據 “國標 4789.4-2016 食品安全國家標準 – 食品微生物檢驗 – 沙門氏菌測試” 部分 5.1 或其他適用的標準, 透過預富集處理樣品, 並製備菌懸浮液備用. 重量25克 (毫升) 的樣本並將其放入含有 225mL 緩衝蛋白腖水的無菌均質杯中 (BPW). 以 8000rpm/min 至 10000rpm/min 均質 1min 至 2min 或置於裝有 225mL BPW 的無菌均質袋中，以胃管均質 1min 至 2min. 如果樣品是液體, 沒有必要同質化; 搖勻. 如果需要測量 pH 值, 以1mol/mL無菌NaOH或HCl調節pH至6.8±0.2。進行無菌操作，將樣品轉移至500mL錐形瓶中. 如果使用均質袋, 可以直接栽培. 36℃±1℃孵育8小時至18小時. 如果樣品是冷凍產品, 45℃以下解凍不超過15min，2℃～5℃解凍不超過18h。參考三石生物 “Total DNA/RNA萃取試劑盒 手動的” (目錄: DP201) 或其他符合從加工樣本中萃取核酸的相關要求的核酸萃取試劑盒/方法. 將萃取的核酸樣本放入冰箱並儘快進行檢測. 4℃保存不超過 7 天或在-20°C 不超過 6 月.

2. 反應體系製備 (反應區)

2.1 取出套件中的每個組件, 室溫下完全解凍, 離心機用於 10 秒, 將管壁和管帽內的液體離心至管底. 依樣品量配製反應液 (n+2, 其中 n 是樣本數, 建議設定 1 陽性對照和 1 每個實驗的陰性對照). 具體製備方法: 拿 (n+2) 含有 Sal 預混溶液的反應管, 在每個管中加入 11.5μL PiHV 反應溶液, 使用移液管充分混合, 23每孔 µL, 並存放在冷卻器中.

2.2 然後依序加入2μL陰性對照, 萃取樣本核酸, Sal陽性對照反應液. 關閉管蓋, 做一個記錄, 每個反應總體積為25μL. 充分混合, 離心機用於 10 秒, 並在PCR儀上進行擴增實驗.

3. PCR擴增 (擴增及產物分析區)

95°C 預變性 2 分分鐘; 95°C 變性 10 秒, 60°C 退火和延伸 35 秒, 40 週期. 在 60°C 收集螢光訊號. 選擇 FAM 螢光通道 (使用ABI系列等即時螢光定量PCR儀器, 如果需要的話, 聯絡製造商或添加 ROX 修正染料; 否則, 遵循正常程序).

4. 結果解讀

4.1 實驗有效性的條件:

陽性對照: FAM 頻道中的 Ct 值 < 28 和一個的出現 “S”-成形擴增曲線. 陰性對照: 無Ct值或Ct值≥ 40 和不 “S”-成形擴增曲線. 實驗結果在這些條件下有效; 否則, 重複實驗. 如果重複測試仍然無效, 請聯絡廠商技術人員.

4.2 樣本結果的解釋:

CT值≤ 35 與 “S”-形狀擴增曲線被認為是沙門氏菌核酸陽性. Ct 值之間 35 和 40 被認為可疑, 並建議重新測試. 這可能是由於核酸萃取不合格或存在強抑制物質所致 (例如殘留的消毒劑, 抗凝血劑, ETC。). 建議對樣本進行後處理，進行核酸萃取和擴增. 第一的, 排除 “假陽性” 氣溶膠污染造成的結果, 然後重新萃取並檢測核酸. 如果, 排除氣溶膠污染後, FAM 頻道重新測試顯示 Ct 值 < 35 具有清晰的擴增曲線, 它被認為是積極的; 否則, 它被認為是負面的.

無Ct值或Ct值≥ 40 和不 “S”-形狀的擴增曲線被認為是沙門氏菌核酸陰性.

預防措施：

• 為防止污染, 實驗應嚴格分區, 分區之間最好物理隔離，避免人為因素造成的交叉污染. 實驗過程中穿實驗服和乳膠手套, 在不同領域獨立使用工具, 需要時更換手套和實驗室外套. PCR後, 不要立即打開蓋子; 充分冷卻後打開，以最大程度地減少氣溶膠污染.
• 使用前將試劑完全解凍, 但避免反覆凍融循環. 套件中提供的PCR反應管為0.2mL; 如果需要更換, 完全解凍後轉移. 嚴格按照試劑製備及樣品添加說明進行操作. 工作站, 離心機, 移液器, 及其他器具應定期以含氯消毒劑消毒, 酒精, 核酸去污劑, 或紫外線.
• 陰性結果不一定代表宿主沒有感染病毒. 樣品品質差, 病毒量低, 或存在強抑制物質 (例如酒精, 消毒劑, 抗凝血劑, ETC。) 可能會導致核酸萃取不成功 (偵測) 和一個 “消極的” 結果. 遵循結果解釋標準, 當出現可疑結果時, 首先排除氣溶膠污染. 如果還有其他問題, 聯絡廠商技術人員.
• 本產品僅供一次性使用. 試劑中的成分對自然光敏感; 包裝及儲存過程應避免光照. 包裝後, 請勿反覆凍融. 僅供科學研究使用; 不用於臨床診斷或其他目的.