三石生物 Taq DNA 聚合酶 (不含 Mg2+) 10 x 5000U

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描述

Taq DNA聚合酶

編號E001B 規格:500U/1000U/5000U存儲: 儲存於-20°C

產品介紹

該產品是Taq DNA聚合酶, 通常稱為 Taq 酶, 這是最廣泛使用的 DNA 聚合酶之一. 克隆水生棲熱菌DNA聚合酶基因,在大腸桿菌中表達,並經過多步驟純化. 這 聚合酶鍊式反應 使用此產品擴增的產品在 3 位添加了 A 鹼基′ 結尾, 允許克隆到 T 載體中.

產品特點:

Sanshibio Taq DNA 聚合酶是一種經過改良和篩選的 Taq DNA 聚合酶. 除了傳統酵素本身的特徵外, 經過反覆測試還具有更廣泛的優勢.
第一的, Sanshibio的Taq酶配備了基本的通用緩衝液, 對常見植物有良好的放大作用, 動物, 微生物的, ETC. DNA或cDNA; 相容於市場上大多數主流廠商的緩衝器; 改良酵素與基礎通用緩衝液結合可實現更強的抵抗力, 並能耐受含有大量雜質的DNA粗萃取物; 穩定性更強,可耐受多次凍融循環; 對於一些低豐度模板, 可以減少酵素的添加量, 並適當增加鎂離子的量,以達到更靈敏的檢測.

產品內容:

成分E001B-01(500U)E001B-02(1000U)E001B-03(5000U)
Taq DNA聚合酶(5U/μL)100微升200微升1毫升
dNTP 混合物 (10每個毫米)100微升200微升1毫升
10× PCR 緩衝液 (鎂2+ 自由的)

 

1毫升2×1毫升10×1毫升
氯化鎂2 (25毫米)1毫升2×1毫升10×1毫升

貯存:

儲存於-20°C, 最短保存期限為 12 月.

活動定義:

使用活化的大口黑鱸精子 DNA 作為模板/引物, 的攝取量 10 nmol 總核苷酸作為酸不溶性物質 30 74°C 分鐘定義為 1 活動單位 (U).

品質管制:

本產品經過品質檢測,不含核酸內切酶活性, 核酸外切酶活性, 和核糖核酸酶污染. 殘留宿主基因組DNA如下 10 副本.

產品用途:

使用PCR方法擴增DNA; DNA序列測定.

使用說明:

  • 溶解並混合 PCR 反應所需的所有溶液,並將其置於冰浴或冷卻器中. 建議分裝 PCR 反應混合物以避免重複凍融循環.
  • 建議將PCR反應系統設置在冰浴或冷卻器中, 以下推薦反應體系供參考.
  • 過多的模板 DNA 會導致非特異性 PCR 產物. 50 µL 反應體積中不同類型模板的建議模板量如下:

動物和植物的基因組 DNA: 0.1-1微克;

來自大腸桿菌的基因組 DNA: 10-100的;

質粒DNA: 0.1-10的.

推薦反應系統:

試劑50µL 系統體積最終濃度
Taq DNA聚合酶1微升0.1U
10× PCR 緩衝液 (鎂2+ 自由的)5微升
氯化鎂2 (25毫米)4微升2毫米
dNTP 混合物 (10每個毫米)1微升0.2每個毫米
底漆一 (10微米)1微升0.2微米
第一二號 (10微米)1微升0.2微米
模板DNA1微升
DDH2至 50 µL

筆記: 反應體系中各組分的用量可依實際需求調整.

  • 用移液管將準備好的反應體系徹底吹打並混合, 用蓋子密封 PCR 管, 給它們貼上適當的標籤, 並在室溫下短暫離心.
  • Place the prepared PCR tubes into the PCR機, 設定反應條件, 並啟動PCR反應.

反應條件:

方法/步驟時間設定週期
95℃ (預變性)2-5分分鐘1
95℃ (變性)30秒25-35 週期
55℃-60℃ (退火)30秒
72℃ (擴大)1分分鐘
72℃ (最終延期)10分分鐘1
4℃(保持)無窮大

筆記: 反應條件可依實際要求進行調整和最佳化.

預防措施:

  1. 延伸時間可依PCR產物的長度、GC含量等因素調整. 產品每kb的延伸時間與模板的複雜程度密切相關: 簡單的模板需要 20 秒, 典型的模板需要 30 秒, 並且需要複雜的模板 1 分分鐘.
  2. PCR 反應的設定應根據不同的條件(例如模板)進行定制, 引子, PCR產物長度, 和GC含量. 引子的終濃度通常在0.1-1.0μM範圍內. DNA模板濃度可隨之調整. 適用於複雜模板或高 GC 含量, 建議延長預變性/變性或延伸時間並提高變性/退火溫度.
  3. 擴增前後使用指定區域和移液器, 戴手套, 並經常改變它們. PCR反應完成後, 不要立即打開反應管. 打開前讓其在 4°C 或 -20°C 下充分冷卻,以最大程度地降低 PCR 產品污染實驗室環境的風險.

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