Taq DNA聚合酶
編號：E001B 規格：500U/1000U/5000U存儲: 儲存於-20°C
產品介紹：
該產品是Taq DNA聚合酶, 通常稱為 Taq 酶, 這是最廣泛使用的 DNA 聚合酶之一. 克隆水生棲熱菌DNA聚合酶基因，在大腸桿菌中表達，並經過多步驟純化. 這 聚合酶鍊式反應 使用此產品擴增的產品在 3 位添加了 A 鹼基′ 結尾, 允許克隆到 T 載體中.
產品特點:
Sanshibio Taq DNA 聚合酶是一種經過改良和篩選的 Taq DNA 聚合酶. 除了傳統酵素本身的特徵外, 經過反覆測試還具有更廣泛的優勢.
第一的, Sanshibio的Taq酶配備了基本的通用緩衝液, 對常見植物有良好的放大作用, 動物, 微生物的, ETC. DNA或cDNA; 相容於市場上大多數主流廠商的緩衝器; 改良酵素與基礎通用緩衝液結合可實現更強的抵抗力, 並能耐受含有大量雜質的DNA粗萃取物; 穩定性更強，可耐受多次凍融循環; 對於一些低豐度模板, 可以減少酵素的添加量, 並適當增加鎂離子的量，以達到更靈敏的檢測.
產品內容：
| 成分 | E001B-01（500U） | E001B-02（1000U） | E001B-03（5000U） |
| Taq DNA聚合酶（5U/μL） | 100微升 | 200微升 | 1毫升 |
| dNTP 混合物 (10每個毫米) | 100微升 | 200微升 | 1毫升 |
| 10× PCR 緩衝液 (鎂2+ 自由的)
| 1毫升 | 2×1毫升 | 10×1毫升 |
| 氯化鎂2 (25毫米) | 1毫升 | 2×1毫升 | 10×1毫升 |
貯存:
儲存於-20°C, 最短保存期限為 12 月.
活動定義:
使用活化的大口黑鱸精子 DNA 作為模板/引物, 的攝取量 10 nmol 總核苷酸作為酸不溶性物質 30 74°C 分鐘定義為 1 活動單位 (U).
品質管制:
本產品經過品質檢測，不含核酸內切酶活性, 核酸外切酶活性, 和核糖核酸酶污染. 殘留宿主基因組DNA如下 10 副本.
產品用途:
使用PCR方法擴增DNA; DNA序列測定.
使用說明:
- 溶解並混合 PCR 反應所需的所有溶液，並將其置於冰浴或冷卻器中. 建議分裝 PCR 反應混合物以避免重複凍融循環.
- 建議將PCR反應系統設置在冰浴或冷卻器中, 以下推薦反應體系供參考.
- 過多的模板 DNA 會導致非特異性 PCR 產物. 50 µL 反應體積中不同類型模板的建議模板量如下:
動物和植物的基因組 DNA: 0.1-1微克;
來自大腸桿菌的基因組 DNA: 10-100的;
質粒DNA: 0.1-10的.
推薦反應系統:
| 試劑 | 50µL 系統體積 | 最終濃度 |
| Taq DNA聚合酶 | 1微升 | 0.1U |
| 10× PCR 緩衝液 (鎂2+ 自由的) | 5微升 | 1× |
| 氯化鎂2 (25毫米) | 4微升 | 2毫米 |
| dNTP 混合物 (10每個毫米) | 1微升 | 0.2每個毫米 |
| 底漆一 (10微米) | 1微升 | 0.2微米 |
| 第一二號 (10微米) | 1微升 | 0.2微米 |
| 模板DNA | 1微升 | — |
| DDH2氧 | 至 50 µL | — |
筆記: 反應體系中各組分的用量可依實際需求調整.
- 用移液管將準備好的反應體系徹底吹打並混合, 用蓋子密封 PCR 管, 給它們貼上適當的標籤, 並在室溫下短暫離心.
- Place the prepared PCR tubes into the PCR機, 設定反應條件, 並啟動PCR反應.
反應條件:
| 方法/步驟 | 時間設定 | 週期 |
| 95℃ (預變性) | 2-5分分鐘 | 1 |
| 95℃ (變性) | 30秒 | 25-35 週期 |
| 55℃-60℃ (退火) | 30秒 | |
| 72℃ (擴大) | 1分分鐘 | |
| 72℃ (最終延期) | 10分分鐘 | 1 |
| 4℃（保持） | 無窮大 | — |
筆記: 反應條件可依實際要求進行調整和最佳化.
預防措施:
- 延伸時間可依PCR產物的長度、GC含量等因素調整. 產品每kb的延伸時間與模板的複雜程度密切相關: 簡單的模板需要 20 秒, 典型的模板需要 30 秒, 並且需要複雜的模板 1 分分鐘.
- PCR 反應的設定應根據不同的條件（例如模板）進行定制, 引子, PCR產物長度, 和GC含量. 引子的終濃度通常在0.1-1.0μM範圍內. DNA模板濃度可隨之調整. 適用於複雜模板或高 GC 含量, 建議延長預變性/變性或延伸時間並提高變性/退火溫度.
- 擴增前後使用指定區域和移液器, 戴手套, 並經常改變它們. PCR反應完成後, 不要立即打開反應管. 打開前讓其在 4°C 或 -20°C 下充分冷卻，以最大程度地降低 PCR 產品污染實驗室環境的風險.
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