Solarbio肌酸激酶 (CK) 活性測定試劑盒

肌酸激酶 (CK) 活性測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 分光光度計

目錄號: BC1140

尺寸:50T/48S

成分:

萃取液: 60 毫升×1. 4℃保存.

試劑一: 粉末×1, -20℃避光保存. 溶於 10 使用前的毫升蒸餾水, 未使用的試劑重新包裝後應保存於-20℃, 禁止重複冷凍和解凍.

試劑二: 粉末×1, -20℃保存. 溶於 0.5 使用前的毫升蒸餾水, 未使用的試劑重新包裝後應保存於-20℃, 禁止重複冷凍和解凍.

試劑三: 粉末×2, -20℃保存. 溶於 0.5 使用前的毫升蒸餾水, 不能用完的試劑重新包裝後應-20℃保存, 禁止重複冷凍和解凍.

試劑四: 粉末×1, -20℃保存. 溶於 0.65 使用前的毫升蒸餾水, 未使用的試劑重新包裝後應保存於-20℃, 禁止重複冷凍和解凍.

試劑V: 15 毫升×1. 4℃保存.

產品描述:

肌酸激酶 (CK) (歐共體 2.7.3.2) 也稱為肌酸磷酸激酶, 主要存在於心裡, 肌肉, 和大腦. 它可以可逆地催化肌酸和ATP之間的轉磷反應. 是與細胞能量運輸直接相關的重要激酶, 肌肉收縮和 ATP 再生.

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP, 己糖激酶催化 ATP 和葡萄糖生成葡萄糖-6-磷酸, 6-磷酸葡萄糖去氫酶催化葡萄糖-6- 磷酸鹽和 NADP+ 生成 NADPH, 導致增加 340 nm光吸收值, 用於表達CK酶活性.

需要但未提供的試劑和設備

體重計, 低溫離心機, 恆溫水浴, 分光光度計, 1 mL 石英比色皿和蒸餾水.

程式

我. 粗酵素液的萃取:

1. 1. 組織樣本:

組織品質比例 (G): 萃取液體積 (毫升): 1:5〜10 (建議權衡一下 0.1 克組織, 添加 1 萃取液毫升數) 用於冰浴均勻性. 離心機在 10000 ×g 為 15 4℃ 分鐘, 取上清液置於冰上進行測試.

2. 血清樣本:

直接測定.

3. 細胞樣本:

細胞數量 (104): 萃取液的體積(毫升) 是500~1000:1 (1 建議添加 mL 萃取液 5 百萬個細胞), 添加萃取液, 冰浴中超音波破碎細胞 (力量: 300瓦, 超音波: 3s, 間隔: 7s, 總時間: 3 分分鐘). 離心機在, 10000×g 為 10 4℃ 分鐘, 取上清液置於冰上待測.

二. 測試 程式:

1. 將分光光度計預熱超過 30 分分鐘, 調整波長至 340 奈米, 並用蒸餾水調至零.
2. 工作溶液: 混合試劑 I, 試劑二, 試劑三, 試劑IV和試劑V的比例 70:4:7:10:90 (體積比) 使用前. 準備何時使用溶液. 孵化 20 使用前在室溫下放置幾分鐘 (這一步不能省略).
3. 手術台: 將下列試劑加入 1 毫升比色皿

三、. 計算 CK:

• 以組織蛋白濃度計算:

酵素活性的定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生某種物質的酵素量 1 37℃、pH7.0 每毫克蛋白質每分鐘 nmolof NADPH.

肌酸激酶活性 (U/毫克蛋白質) = ΔA÷(ε×d)×VRT×109 ÷ (VS×心肺復甦) ÷ T= 268 ×ΔA÷Cpr

• 根據組織樣本的品質計算:

酵素活性的定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生某種物質的酵素量 1 37℃、pH7.0每克樣品中每分鐘nmol NADPH.

肌酸激酶活性 (U/g鮮重) = ΔA÷(ε×d)×VRT×109 ÷ (VS÷VST×W) ÷T= 268×ΔA÷W

• 以血清體積計算:

酵素活性的定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生某種物質的酵素量 1 37℃、pH7.0每毫升血清中每分鐘nmol NADPH.

肌酸激酶活性 (單位/毫升) = ΔA÷(ε×d)×VRV×109 ÷ VS÷T= 268×ΔA

• 按細胞計數:

酵素活性的定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生某種物質的酵素量 1 37℃、pH7.0 每分鐘 nmol NADPH 10000 細胞.

肌酸激酶活性 (U/104細胞)=ΔA÷(ε×d)×VRV×109÷(VS ÷ VST×N)÷T=268×ΔA÷N

e: NADPH 摩爾消光係數, 6.22×103公升/摩爾/厘米; d: 比色皿光徑, 1 公分;

虛擬實境測試: 反應體系總體積, 0.001 毫升;

VS: 反應體系中樣品體積, 0.2 毫升; 變速: 萃取液體積, 1 毫升;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升; 瓦: 樣品質量的質量, G;

氮: 細胞數量, 104 單位; 時間: 反應時間, 3 分分鐘.

筆記:

1. 血清CK不穩定. 盡快採集並測量樣品. 血清CK穩定 24 4℃避光保存數小時後.
2. 樣品的蛋白質含​​量需要單獨測定. BCA蛋白 含量測定試劑盒可用於測定.
3. 如果OD值大於 0.6, 樣本可用萃取液適當稀釋, 並可依稀釋比例改變計算公式.
4. ΔAB一般不超過 01.

實驗實例：

1. 取小鼠腦0.1g, 加入1mL萃取液, 均質並研磨. 取上清液, 然後用萃取物稀釋 4 次並根據測量的步數進行檢測. 計算ΔAT=A2T- A1T=0.638-0.149=0.489, ΔAB=A2B-A1B=0， ΔA=ΔAT-ΔAB=0.489-0=0.489, 根據樣品重量計算酵素活力:

CK活力（U/g重量）=268×ΔA÷W×4（稀釋倍率）=268×0.489÷0.1×4（稀釋倍數）

=5242.08U/克重量.

2. 取鴨血清200μL直接檢測, 計算ΔAT=A2T-A1T=0.445-0.423=0.022, ΔAB=A2B- A1B=0, ΔA=ΔAT-ΔAB=0.022-0=0.022, 根據血清體積計算酵素活力:

CK活力（U/mL）=268×ΔA=268×0.022=5.896 U/mL.

參考：

• Defang Li, Ning Lu, JichunHan, 等。聖草酚透過活化 JAK2 減輕心肌缺血再灌注損傷. 免疫學前沿. 2018年1月;(IF3.845)
• 徐勇, 猛, 侯旭, 等人. ButhusmartensiiKarsch 抗腫瘤鎮痛勝肽的突變體表現出對 hNav1 的抑製作用降低. 4 和 hNav1. 5 通道同時保留鎮痛活性[J].生物化學雜誌, 2017, 292(44):18270-18280

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