Solarbio羥脯胺酸 (霍普) 活性測定試劑盒

羥脯胺酸 (霍普) 活性測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

檢測設備: 分光光度計/酶標儀

目錄號: BC0255

尺寸: 100T/96S

成分:

萃取液: 6 mol/L鹽酸 (鹽酸), 自備試劑. 濃鹽酸（37%） : 水(電壓/電壓) =1:1, 室溫保存.

試劑一: 8 毫升×1, 4℃避光保存. 試劑二: 8 毫升×1, 4℃避光保存. 標準: 0.5 毫升×1, 0.5 mg/mL 羥脯氨酸, 4℃保存.

描述:

HYP是體內膠原蛋白的主要成分之一. 大部分膠原蛋白分佈在皮膚中, 肌腱, 軟骨, 和血管等. 所以, HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的重要指標.

樣品水解產生遊離 HYP, 被氯胺T進一步氧化. 氧化產物與對二甲氨基苯甲醛反應生成紅色化合物，其特徵吸收峰在 560 奈米. 透過測定樣品水解液在5℃下的吸光值，即可計算出HYP的含量。 560 奈米.

需要但未提供:

體重計, 烤箱, 玻璃管, 離心機, 水浴, 分光光度計/酶標儀, 微型玻璃比色皿/96孔板, 6 mol/L HCl 和蒸餾水.

程式:

我. 樣品製備

1. 1. 組織樣本:

掂量一下 0.2 g 樣品放入玻璃管中, 盡可能將組織切成碎片以便消化. 添加 2 mL 萃取液，蓋子稍鬆，不密閉, 煮沸或放入110℃烤箱烘烤 2 到 6 幾個小時消化它，直到沒有可見的大腫塊.

冷卻後, 調節pH值至 6-8 和 10 摩爾/公升氫氧化鈉 (不要過酸或過鹼) 然後定容至 4 mL 加蒸餾水. 離心於 16000 轉速為 20 分 25℃ (離心後是否仍有雜質, 它可以通過過濾去除).

取上清液待測. (過程中可能會形成黑色物質, 如果長時間不能消化, 它可能是碳化物質. 不影響實驗).

2. 細胞:

拿 5 百萬個細胞, 添加 1 萃取液毫升數, 熬, 或烤箱110℃ 2 到 6 消化至透明狀態的小時.

冷卻後, 調節pH值至 6-8 和 10 摩爾/公升氫氧化鈉 (不要過酸或過鹼) 然後定容至 2 mL 加蒸餾水. 離心於 16000 轉速為 20 分 25℃ (離心後是否仍有雜質, 它可以通過過濾去除).

取上清液待測.

二. 偵測

1. 預熱分光光度計/酵素標儀 30 分分鐘, 調整波長至 560 nm 並用蒸餾設定零
2. 將標準溶液稀釋至 30, 15, 7.5, 3.75, 1.875, 0.938, 0.469, 0.234 微克/毫升.
3. 添加試劑如下表.

攪拌均勻, 60℃孵育 20 分分鐘, 將其置於室溫下 15 分分鐘, 取200μL反應液置於微量玻璃比色皿/96孔平底板中，測定吸光度值 560 奈米. ΔA=AT – AB.

三、. 計算

1. 標準的製定

製作標準曲線時, 以標準溶液的濃度為x軸, 和ΔAS (ΔAS=AS-AB) 被視為y軸. 得到線性方程式y=kx+b. 取ΔAT (AT-AB) 代入方程式求得x.

2. 羥脯胺酸含量的計算:以樣品鮮重計算:

組織羥脯胺酸含量 (μg/g鮮重) = x×VS÷(W×VS÷VTE) = 4x​​÷W.

• 根據樣品蛋白濃度計算:

組織羥脯胺酸含量 (微克/毫克蛋白質) = x×VS÷(心肺復甦×VS) = x÷Cpr.

• 以細菌或細胞數計算:

細胞羥脯胺酸含量 (微克/104個細胞) = x×VS÷(N×VS÷VCE )= 2x÷N.

VS: 加入樣品的體積, 0.06 毫升;

靜脈血栓栓塞症: 組織萃取液體積, 4 毫升; VCE: 細胞萃取液體積, 2 毫升;

瓦: 樣品鮮重, G;

氮: 細胞數量,104 作為單位, 10000;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升.

筆記

1. 如果OD值大於 1.0, 樣品應適當稀釋後測定. 注意計算公式中乘以稀釋倍數.
2. 該試劑有一定毒性. 操作時請採取防護措施，防止吸入或接觸皮膚.
3. 根據樣品蛋白濃度計算時, 樣品本身的蛋白質需要單獨萃取並測定.

實驗實例

• 0.2取g小鼠腿進行樣品處理, 取出上清液，依測定步驟操作. ΔA=AT-AB= 0.177-0.06 = 0.117 是透過測量 96 孔板, 標準曲線 y = 0.0383x + 0.022 被帶進來, 且 x = 2.48 是

組織中羥脯胺酸的含量 (微克/克質量) = 4x​​ ÷ W = 4 × 2.48 ÷ 0.2 = 49.6 微克/克質量.

最近的產品引用

• Litong Fan,Jiaqing Chen,Yanmeng Tao,等人. ghrelin增強間質幹細胞的軟骨分化與軟骨修復. 骨科研究雜誌. 一月 2019;(IF3.043)

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技術規格:

檢測極限: 0.057 微克/毫升

線性範圍: 0.117-30 微克/毫升