Solarbio丙二醛 (丙二醛) 含量測定試劑盒

丙二醛 (丙二醛) 含量測定試劑盒

筆記: 有必要預測 2-3 正式測定前差異較大的樣品. 操作設備: 分光光度計.

目錄號: BC0020

尺寸: 50T/48S

成分:

筆記: MDA檢測工作液難以溶解, 可加熱70℃並劇烈振動促進溶解. 或透過超音波處理促進溶解.

產品描述:

• 過氧化脂質是透過氧自由基與不飽和脂肪酸相互作用產生的, 最後形成丙二醛等化合物 (丙二醛). 脂質過氧化水平作為指標, 可以透過測量 MDA 水平來評估.
• 在酸性和高溫條件下, 棕紅色化合物, 3,5,5-三甲基磺胺甲噁唑-2,4-二酮, 透過丙二醛和硫代巴比妥酸的縮合反應合成 (待定). 該化合物在以下溫度下表現出最大吸收： 532 奈米. 脂質過氧化的評估涉及比色分析. 然而, 可溶性糖的存在會幹擾檢測過程. 可溶性糖與 TBA 反應產生顯色反應，吸收波長為 450 奈米和 532 奈米. 在該檢測試劑盒中, MDA 含量由吸光度變異數決定 532 奈米, 450 奈米, 和 600 奈米.
• 由於植物組織中存在蔗糖，動物組織中存在葡萄糖, 該套件包括兩個專為蔗糖和葡萄糖量身定制的計算公式. 這些公式適合血脂評估.

需要但未提供的試劑和設備:

分光光度計, 水浴, 桌上型離心機, 移液管,1 毫升玻璃比色皿, 研缽/均質器, 冰和蒸餾水.

程式:

我. 樣品製備:

細菌或細胞:

將細菌或細胞收集到離心管中. 5 數以百萬計的細菌或細胞可以與 1 萃取試劑毫升數. 使用超音波破碎細菌和細胞 (置於冰上, 超音波功率200W, 超音波時間 3 秒, 間隔 10 秒, 重複 30 次). 離心機在 8000 ×g 為 10 4℃分鐘去除不溶物, 並在測試前將上清液放在冰上.

組織:

0.1 g 組織可與 1 mL 萃取試劑並在冰浴上完全均質. 然後離心 8000 ×g 為 10 4℃分鐘去除不溶物, 並在測試前將上清液放在冰上.

血清:

探測

二. 決心 程式:

1. 預熱分光光度計超過 30 分分鐘, 用蒸餾器調零
2. 加入如下清單的試劑:

將混合物在 100℃ 下孵育 60 分分鐘 (緊密貼合，防止水分流失), 冰上冷卻, 並離心於 10000 ×g 為 10 室溫下幾分鐘以去除不溶物質. 取上清液於 1 毫升玻璃比色皿, 並測量吸光度 450 奈米, 532 奈米和 600 奈米.

ΔA450=A450(時間)-A450(乙), ΔA532=A532(時間)-A532(乙), ΔA600 =A600(時間)-A600(乙). 空白管需要測試一到兩次.

三、. 計算:

1. 組織, 細菌或培養細胞

• 蛋白質濃度:

丙二醛 (納摩爾/毫克蛋白質)=(6.45×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv÷(Cpr×Vs)

=5×(6.45×(ΔA532-ΔA600)-1.29×ΔA450)÷心肺復甦

• 樣品重量:

丙二醛 (納摩爾/克重量)=( 6.45×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×ΔA450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×ΔA450)÷W

• 賽拉蒙:

丙二醛 (納摩爾/104細胞)=( 6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×AΔ450)×Vrv÷(400×Vs÷Vsv)

=0.01×(6.45×(ΔA532-ΔA600)- 1.29×ΔA450)

• 血清:

丙二醛 (納摩爾/毫升)=(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv÷Vs

=5×(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)

2. 植物組織:

• 樣品重量

丙二醛 (納摩爾/克重量)= (6.45×(ΔA532-ΔA600)-0.56×ΔA450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 0.56×ΔA450)÷W

• 蛋白質濃度:

丙二醛 (納摩爾/毫克蛋白質)=( 6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 0.56×ΔA450)×Vrv÷(Cpr×Vs)

=5×(6.45 ×(ΔA532-ΔA600)- 0.56×ΔA450)÷心肺復甦

繩索: 總反應體積, 1 毫升; VS: 樣品量, 0.2 毫升;

電壓: 萃取量, 1 毫升;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升; 瓦: 樣品重量, G;

400: 細菌和細胞總數, 5 百萬.

筆記:

如果發現樣品吸光度值過低, 沸水浴時間可調節 60 分鐘到 90 分鐘或更長時間. 同一實驗中MDA的檢測需要延長到同一時間以避免錯誤.

參考

• 斯皮茲D R, 奧伯利LW. 哺乳類組織勻漿中超氧化物歧化酶活性的測定[J]. 分析生物化學,1989
• 中正康, 浩志. 一種臨床上用超氧化物歧化酶活性的簡化測定方法[J]. 化學診所

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