過氧化物酶 (莢) 活性測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 分光光度計 目錄編號: BC0090 尺寸：50T/48S

成分:

萃取液: 60 毫升×1. 4℃保存.

試劑一: 40 毫升×1. 4℃保存.

試劑二: 0.5 毫升×1. 4℃保存. 使用前離心. 拿 0.22 mL 試劑 II 並加入 3.33 試劑 I 毫升, 混合備用 (約27T). 準備好立即使用, 或依樣品體積按比例配製.

試劑三: 10 毫升×1. 4℃保存.

產品描述

過氧化物酶 (莢, 歐共體 1.11.1.7) 廣泛存在於動物體內, 植物, 和微生物. 可催化過氧化氫氧化酚類和胺類, 並具有消除過氧化氫毒性的雙重功效, 酚類, 和胺類. 在過氧化氫存在下, POD可以催化H2O2氧化特定底物產生一種物質，該物質在 470 奈米.

需要但未提供的試劑和設備

分光光度計, 桌上型離心機, 轉讓者, 1 毫升玻璃比色皿, 研缽/均質器, 冰和蒸餾水.

程式

我. 樣品製備:

A. 細菌或細胞

將細菌或細胞收集到離心管中, 離心後棄去上清液. 建議採取約 5 萬個細菌/細胞並添加 1 萃取液毫升數. 透過超音波破碎細菌或細胞 (力量: 20% 或者 200 瓦, 工作時間3s, 間隔10秒, 重複 30 次). 離心機在 8000 rpm 和 4℃ 10 分分鐘, 上清液用於測試.

乙. 組織

建議採取約 0.1 g 組織並加入 1 萃取液毫升數, 在冰上充分研磨.

離心機在 8000 轉速為 10 4℃ 分鐘, 上清液用於測試.

C. 血清 (電漿) 樣本: 檢測樣品

二. 決心 程式

1. 預熱分光光度計 30 分分鐘, 調整波長至 470 奈米, 用蒸餾器調零
2. 放置試劑 I, 試劑II和試劑III 37℃ (哺乳動物) 或25℃(其他物種) 為了 10 分鐘前
3. 加入如下清單的試劑:

將上述試劑加入 1 mL 玻璃比色皿（依序排列）, 立即混合併計時. 吸光度值 A1 為 30 s 和 A2 90 秒 470 記錄奈米, ΔA＝A2-A1.

三、. 計算

我. 血清 (電漿)樣本

單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化吸光度的酵素量 0.01 改變於 470 每毫升血清每分鐘反應系統中的奈米數 (電漿).

莢(單位/毫升)=ΔA×Vrv÷Vsv÷0.01÷T =7133×ΔA

二. 組織, 細菌或培養細胞

A. 蛋白質濃度

單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化吸光度的酵素量 0.01 改變於 470 nm 反應體系中每分鐘每毫克蛋白質.

莢(U/毫克蛋白質)＝ΔA×Vrv÷(Vsv×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

乙. 樣品重量

單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化吸光度的酵素量 0.01 改變於 470 每克組織每分鐘反應系統中的奈米.

莢(U/g鮮重)＝ΔA×Vrv÷(W×Vsv÷Vs)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

C. 賽拉蒙

單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化吸光度的酵素量 0.01 改變於 470 反應體系中每分鐘奈米 10 數千個細菌或細胞.

莢(U/104細胞)＝ΔA×Vrv÷(500×Vsv÷Vs)÷0.01÷T =14.27×ΔA

繩索: 總反應體積, 1.07 毫升; 電壓: 上清液總量, 0.015 毫升; VS: 萃取液體積, 1 毫升;

時間: 反應時間, 1 分分鐘;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升; 瓦: 樣品重量, G;

500: 細菌或細胞總數, 5 百萬.

筆記:

1. 如果同時測定多個樣品, 試劑 I 的混合物, 二, 三、與蒸餾水按比例配製即可, 混合物可置於37℃ (哺乳動物的) 或25℃ (其他物種) 超過 10 分分鐘. 15 µL 樣品和 1055 可添加μL混合物進行測定.
2. 如果 ΔA 小於 0.005, 反應時間可延長至 5 分分鐘. 如果ΔA大於 0.5 或反應液中有較多氣泡, 樣品可以用萃取物稀釋並測定, 計算公式乘以對應的稀釋度.
   

   參考

   • 魯韋尼R . 過氧化物酶活性作為甜瓜抗性生化標記物 ( 黃瓜哈密瓜 ) 古巴假霜霉[J]. 植物病理學, 1992,82(7).
   • 多爾格·D·R , 迪維·R·L , 丘奇韋爾 M I . 過氧化物酶產生的有色癒創木酚氧化產物的鑑定[J]. 分析生物化學, 1997,250(1):10-17.

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