Solarbio 總抗氧化能力 (T-AOC) 檢測試劑盒

總抗氧化能力 (T-AOC) 檢測試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 分光光度計

目錄號: BC1310

尺寸：50T/48S

成分:

萃取液: 液體 50 毫升×1. 4℃保存, 使用前預冷.

試劑一: 液體 35 毫升×1. 4℃保存.

試劑二: 液體 20 毫升×1. 4℃陰暗處保存.

試劑三: 液體 5 毫升×1. 4℃陰暗處保存.

標準: 粉末×1, 10 毫克 FeSO4·7H2O. 工作溶液: 添加 0.9 mL蒸餾水和20μL濃硫酸 (硫酸) 到表格 40 µmol/mL FeSO4 標準溶液. 溶液混合物 (準備何時使用溶液): 試劑一 : 試劑二: 試劑III= 7:1:1, 使用前37℃孵育.

產品描述:

本試劑盒用於檢測樣品中抗氧化劑和抗氧化酶的總抗氧化水平. 主要用於生物研究, 醫學和製藥研究，檢測抗氧化劑溶液的總抗氧化能力.

酸性環境下, Fe3+ -TPTZ 被還原為藍色 Fe2+ -TPTZ. 顯色反應反映總抗氧化能力.

需要但未提供的試劑和設備:

分光光度計, 恆溫水浴, 低溫離心機, 1 mL 玻璃比色皿和蒸餾水.

程式:

我. 樣品製備:

1. 血清, 電漿, 唾液, 或尿液樣本

電漿 (肝素或檸檬酸鈉抗凝血, 避免使用 EDTA), 離心機在 5000 轉/分對於 10 分分鐘, 取上清液進行測試. 服用血清, 用於直接測定的唾液或尿液樣本. 也, 可在-80℃保存檢測 30 天.

2. 細胞或組織 樣本

拿 1-2 萬個細胞或 0.1 克組織, 添加 1.0 萃取液毫升數. 使用勻漿或超音波充分破碎細胞並釋放抗氧化劑, 離心機在 10000 r/min 和 4℃ 5 分分鐘, 取上清液進行測試. 如果需要，測量蛋白質濃度.

二. 測定程序:

1. 稀 40 μmol/mL FeSO4 標準溶液 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 微摩爾/毫升, 拿 500 µL 標準溶液 (空白對照蒸餾水), 添加 500 µL 試劑 II. 充分混合 10 分分鐘, 檢測吸光度 593 奈米, 計算ΔA=AS-AB. (作為: 標準溶液管, AB: 空白對照管。) Fe2+的最終濃度為 0.05、0.025、0.0125、0.00625、

0.003125、0.00156 微摩爾/毫升.

2. 預熱分光光度計 30 分分鐘, 調整波長至 593 nm 並用蒸餾設定零
3. 加入如下清單的試劑:

三、. 計算:

1. 建立標準曲線

以Fe2+終濃度為X軸, △A為Y軸, 建立標準曲線, 得到線性迴歸方程式 y=kx+ b, 取ΔA’ 代入方程式得到x (微摩爾/毫升).

2. 單位定義: 樣品抗氧化能力以相同吸光度變化所需的標準液體離子濃度來表示(ΔA).

A. 蛋白質 專注:

總抗氧化能力 (μmol/mg蛋白質) = x × Vrv÷ (Vs×心肺復甦) = 34× x ÷ 心肺復甦術

乙. 樣本 重量

總抗氧化能力 (μmol/g重量) = x × Vrv÷ (Vs ÷ Vsv ×W) =34×x÷W

C. 細胞 數量

總抗氧化能力 (μmol/104細胞) = x × Vrv÷ (Vs×Vsv÷n) = 34× x÷ n

D. 解決方案 體積

總抗氧化能力 (微摩爾/毫升) =x×Vrv÷Vs=34×x

繩索: 總反應體積, 1.02 毫升; VS: 樣品量, 0.03 毫升;

電壓: 提取體積, 1 毫升; 瓦: 樣品重量, G;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升;

n: 細胞數量, 單位基於 104 (萬).

筆記:

1. 試劑II對人體有刺激, 請穿實驗服和乳膠
2. 樣品在酸性條件下不應呈現藍色, 否則會幹擾取樣結果
3. 洗滌劑，例如吐溫, 海衛一, NP-40 和 DTT 等還原劑, 不應添加巰基乙醇
4. 如果樣品測定的吸光度值超出標準曲線範圍, 樣品使用前應適當稀釋或濃縮
5. 試劑盒應保存於2-8℃.

範例:

1. 將 0.1g 三葉草加入 1mL 萃取液中，在冰上充分研磨, 取上清液, 依照確定程序進行操作, 用96孔平底板進行計算: ΔA=A(時間)-A(乙)=0.909-0.148=0.761, 標準曲線: y=21.056x-0.0087, 計算x=0.037, 根據樣品質量計算總抗氧化能力 (μmol/g質量) =34×x÷W=34×0.037÷0.1=12.85 μmol/g質量.

參考：

[1] 佩萊格里尼, 塞拉菲尼中號, 薩爾瓦多小號, 等人. 香料總抗氧化能力, 乾果, 堅果,

脈衝, 穀物, 透過三種不同的體外測定評估義大利消費的糖果和糖果[J]. 分子營養 & 食品研究, 2006, 50(11): 1030-1038.

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